Immunologisk metodik – Introduktion till laboration

Question 1

Vilka är fe vanliga prostatasjukdomarna? Berätta lite om maligna förändringar i prostata.

Answer 1

• Benign prostatahyperplasi (BPH) • Prostatit – bakteriell eller kronisk • Maligna förändringar = Prostatacancer (PC) – Vanligast hos äldre män – Vanligaste elakartade cancern hos män över 65 år (10 000 män/år drabbas av PC) – Vanligaste dödsorsaken hos män över 65 år (ca 2400 /år)

Question 2

Vad står PSA för?

Answer 2

Prostata Specifikt Antigen = PSA

Question 3

Vad är PSA?

Answer 3

Är ett enkelkedjat glykoprotein

Question 4

Vart produceras PSA? Vart finns de naturligt i kroppen?

Answer 4

Produceras i prostatans körtelepitel Finns normalt i prostatgångarna (sädesvätskan), det PSA som finns i blodet är bara det lilla som läcker ut.

Question 5

Kan PSA halten variera under dygnet?

Answer 5

PSA-halten varierar under dygnet (marginellt)

Question 6

Förändras koncentrationen PSA under livet?

Answer 6

Ja

Question 7

Normal PSA-nivå i blod hos: 40-49 år 50-59 år 60-69 år 70-79 år gammal person?

Answer 7

Normal PSA-nivå i blod:

2,5ng/ml – 40-49 år

3,5ng/ml – 50-59 år

4,5ng/ml – 60-69 år

6,5ng/ml – 70-79 år

Question 8

Vad skall en PAD remiss innehålla vid provtagning av prostata?

Answer 8

Info på remissen: PSA -värde T-stadium: Klinisk bedömning hur prostata känns •T1 - normalt •T2 -tumör •T3 -tumör som känns som att den penetrerar kapseln •T4 -tumör som invaderar omgivande vävnader Övrig information: Kort klinisk info, ibland körtelstorlek

Question 9

Vad betyder TURP?

Answer 9

TransUrethral Resection of the Prostate

Question 10

Berätta om Gleason Grading System

Answer 10

Question 11

Beskriv Gleason score (GS)- summan av Gleason grad (GG)

Answer 11

Gleason summan vid biopsi = Det vanligast mönstret + det farligaste mönstret Ex: I 2 av 10 biopsier ses växt av Gleason grad 3 och i 1 av biopsierna ses Gleason grad 4 och i ytterligare 1 biopsi finns Gleason grad 5. Detta ger att Gleason Summan blir 8 (3+5)

Question 12

Berätta om adna-test prostatecancerselect

Answer 12

Question 13

Berätta om Multiplex-PCR (polymeras chain reaction)/DNA analys

Vad betyder:

PSA

PSMA

EGFR

Actin

Answer 13

Question 14

Vad för färgningar kan krävas vad gäller prostata frågeställning ?

Answer 14

Förutom översiktsfärgning kan immunologisk metod behövas

Question 15

Vilka steg ingår vid immunologisk visualisering, från deparaffinering till mikroskopering?

Answer 15

1.Deparaffinering 2.Rehydrering 3. Ak. i ett el. flera steg (direkt/indirekt metod) 4. ”Framkallning” av färg 5.Dehydrering 6.Montering av täckglas 7.Mikroskopering

Question 16

Beskriv abc metoden

Answer 16

Question 17

Vad är biotin, avidin och strepavidin?

Answer 17

Biotin: vitamin H, vattenlösligt, finns bl.a i äggula. En kvävegrupp ansvarar för bindning till olika proteiner, fyra bindningsställen för t.ex avidin. Avidin: basiskt glykoprotein. Extraheras ur äggvita. Avidin kan ersättas med streptavidin. Streptavidin: protein som saknar sockerenheter vilka man tror kan ge falsk positiv inmärkning. Extraheras ur mediet efter odling av bakterien ”Streptomyces avidini”.

Question 18

Vad har vi för markörer på antikroppar?

Answer 18

Enzymer (ex. peroxidas, alk. fosfatas) Fluorokromr (ex. rodamin, FITC) Metaller (ex. guld, järn) Isotoper (ex. 3H) Biotin (vitamin H)

Question 19

Falskt positivt analyssvar, hur har detta uppstått och hur kan du förhindra det

Answer 19

Antikroppen binder till fel epitoper eller flera olika epitoper (dålig specificitet) *Blockera med serum Förekomst av Ak-bindande endogen komponent *Blockera endogen komponent, med ex.väteperoxid (H2O2) då endogent peroxidas skall blockeras

Question 20

Falskt negativt analyssvar, hur kan detta ha inträffat?

Answer 20

Prepareringen har förstört epitoperna

Epitoperna är maskerade (gelerande fix)

Glömt ak./annat vid visualiseringsmetoden

För svag koncentration på antikropparna

Gamla lösningar

Paraffin kvar på snittet

Glömt antigen retrival

Question 21

PSA-positivt vävnadsprov, vilka visulaiseringar är godkända ?

Answer 21

Bild

Question 22

Vad gör Antigen retrieval ?

Answer 22

Antigen retrieval frilägger epitoper som blivit gömda

Question 23

Ge exempel på enzym inducerad och heat inducerad Antigen retrieval

Answer 23

Enzyme-inducerad: ex.Proteinas K Trypsin Heat-inducerad: ex. Citratbuffert (olika pH)

Question 24

Vad för kontroller skall du använda vid PSA analys? Hur skall du göra med kontrollerna?

Answer 24

Negativa kontroller: Utelämna primärantikropp Utelämna alla antikroppar Positiv kontroll: Positiv testvävnad, graderas, endast viss styrka på inmärkningen godkänns

Question 25

Vad skall du tänka på när du använder DAB, VÄTEPEROXID och xylen

Answer 25

Väteperoxid: (30%): starkt oxiderande, kan ge frätskador. Använd handskar. Kan spolas ner i vasken. DAB: cancerogent. Handskar, skyddsglasögon, skyddskläder, dragskåp. Samlas i särskild behållare – skickas till destruktion. Xylen: cancerogent. Samlas i särskild plåtdunk och skickas till destruktion.

Question 26

berätta om direkt metod inom immunohistokemi

Answer 26

Den direkta metoden går ut på att använda sig av primära antikroppar som binder direkt till antigenet hos det ämne man undersöker eller letar efter. De primära antikropparna färgas med ett fluorescerande ämne eller kolloidala guldpartiklar. Vävnadsprovet som skall undersökas fästs på ett objektglas som sedan får en droppe vätska med antikroppar i på sig. Antikropparna får några minuter på sig att binda in till vävnadsprovet och sedan sköljs den resterande vätskan av. Vävnadsprovet analyseras sedan under mikroskop, se ”Analysering av proverna”. Denna metod, att använda primära antikroppar, ersätts däremot ofta av den indirekta metoden och användningen av sekundära antikroppar då dessa har visat sig vara känsligare och därmed har högre noggrannhet. Den direkta metoden är däremot ett billigare alternativ då det bland annat krävs färre antikroppar.