Immunologisk metodik – Introduktion till laboration Flashcards
Vilka är fe vanliga prostatasjukdomarna? Berätta lite om maligna förändringar i prostata.
• Benign prostatahyperplasi (BPH) • Prostatit – bakteriell eller kronisk • Maligna förändringar = Prostatacancer (PC) – Vanligast hos äldre män – Vanligaste elakartade cancern hos män över 65 år (10 000 män/år drabbas av PC) – Vanligaste dödsorsaken hos män över 65 år (ca 2400 /år)
Vad står PSA för?
Prostata Specifikt Antigen = PSA
Vad är PSA?
Är ett enkelkedjat glykoprotein
Vart produceras PSA? Vart finns de naturligt i kroppen?
Produceras i prostatans körtelepitel Finns normalt i prostatgångarna (sädesvätskan), det PSA som finns i blodet är bara det lilla som läcker ut.
Kan PSA halten variera under dygnet?
PSA-halten varierar under dygnet (marginellt)
Förändras koncentrationen PSA under livet?
Ja
Normal PSA-nivå i blod hos: 40-49 år 50-59 år 60-69 år 70-79 år gammal person?
Normal PSA-nivå i blod:
2,5ng/ml – 40-49 år
3,5ng/ml – 50-59 år
4,5ng/ml – 60-69 år
6,5ng/ml – 70-79 år
Vad skall en PAD remiss innehålla vid provtagning av prostata?
Info på remissen: PSA -värde T-stadium: Klinisk bedömning hur prostata känns •T1 - normalt •T2 -tumör •T3 -tumör som känns som att den penetrerar kapseln •T4 -tumör som invaderar omgivande vävnader Övrig information: Kort klinisk info, ibland körtelstorlek
Vad betyder TURP?
TransUrethral Resection of the Prostate
Berätta om Gleason Grading System
Beskriv Gleason score (GS)- summan av Gleason grad (GG)
Gleason summan vid biopsi = Det vanligast mönstret + det farligaste mönstret Ex: I 2 av 10 biopsier ses växt av Gleason grad 3 och i 1 av biopsierna ses Gleason grad 4 och i ytterligare 1 biopsi finns Gleason grad 5. Detta ger att Gleason Summan blir 8 (3+5)
Berätta om adna-test prostatecancerselect
Berätta om Multiplex-PCR (polymeras chain reaction)/DNA analys
Vad betyder:
PSA
PSMA
EGFR
Actin
Vad för färgningar kan krävas vad gäller prostata frågeställning ?
Förutom översiktsfärgning kan immunologisk metod behövas
Vilka steg ingår vid immunologisk visualisering, från deparaffinering till mikroskopering?
1.Deparaffinering 2.Rehydrering 3. Ak. i ett el. flera steg (direkt/indirekt metod) 4. ”Framkallning” av färg 5.Dehydrering 6.Montering av täckglas 7.Mikroskopering
Beskriv abc metoden
Vad är biotin, avidin och strepavidin?
Biotin: vitamin H, vattenlösligt, finns bl.a i äggula. En kvävegrupp ansvarar för bindning till olika proteiner, fyra bindningsställen för t.ex avidin. Avidin: basiskt glykoprotein. Extraheras ur äggvita. Avidin kan ersättas med streptavidin. Streptavidin: protein som saknar sockerenheter vilka man tror kan ge falsk positiv inmärkning. Extraheras ur mediet efter odling av bakterien ”Streptomyces avidini”.
Vad har vi för markörer på antikroppar?
Enzymer (ex. peroxidas, alk. fosfatas) Fluorokromr (ex. rodamin, FITC) Metaller (ex. guld, järn) Isotoper (ex. 3H) Biotin (vitamin H)
Falskt positivt analyssvar, hur har detta uppstått och hur kan du förhindra det
Antikroppen binder till fel epitoper eller flera olika epitoper (dålig specificitet) *Blockera med serum Förekomst av Ak-bindande endogen komponent *Blockera endogen komponent, med ex.väteperoxid (H2O2) då endogent peroxidas skall blockeras
Falskt negativt analyssvar, hur kan detta ha inträffat?
Prepareringen har förstört epitoperna
Epitoperna är maskerade (gelerande fix)
Glömt ak./annat vid visualiseringsmetoden
För svag koncentration på antikropparna
Gamla lösningar
Paraffin kvar på snittet
Glömt antigen retrival
PSA-positivt vävnadsprov, vilka visulaiseringar är godkända ?
Bild
Vad gör Antigen retrieval ?
Antigen retrieval frilägger epitoper som blivit gömda
Ge exempel på enzym inducerad och heat inducerad Antigen retrieval
Enzyme-inducerad: ex.Proteinas K Trypsin Heat-inducerad: ex. Citratbuffert (olika pH)
Vad för kontroller skall du använda vid PSA analys? Hur skall du göra med kontrollerna?
Negativa kontroller: Utelämna primärantikropp Utelämna alla antikroppar Positiv kontroll: Positiv testvävnad, graderas, endast viss styrka på inmärkningen godkänns
Vad skall du tänka på när du använder DAB, VÄTEPEROXID och xylen
Väteperoxid: (30%): starkt oxiderande, kan ge frätskador. Använd handskar. Kan spolas ner i vasken. DAB: cancerogent. Handskar, skyddsglasögon, skyddskläder, dragskåp. Samlas i särskild behållare – skickas till destruktion. Xylen: cancerogent. Samlas i särskild plåtdunk och skickas till destruktion.
berätta om direkt metod inom immunohistokemi
Den direkta metoden går ut på att använda sig av primära antikroppar som binder direkt till antigenet hos det ämne man undersöker eller letar efter. De primära antikropparna färgas med ett fluorescerande ämne eller kolloidala guldpartiklar. Vävnadsprovet som skall undersökas fästs på ett objektglas som sedan får en droppe vätska med antikroppar i på sig. Antikropparna får några minuter på sig att binda in till vävnadsprovet och sedan sköljs den resterande vätskan av. Vävnadsprovet analyseras sedan under mikroskop, se ”Analysering av proverna”. Denna metod, att använda primära antikroppar, ersätts däremot ofta av den indirekta metoden och användningen av sekundära antikroppar då dessa har visat sig vara känsligare och därmed har högre noggrannhet. Den direkta metoden är däremot ett billigare alternativ då det bland annat krävs färre antikroppar.
