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Intras > intra bio mol (3) > Flashcards

intra bio mol (3) Flashcards

1
Q

définie transgenèse

A

insertion de gène étranger

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2
Q

deux types de catégories

A

classique (croisement/ mutagène)
génétique (transgénèse/ manipulation)

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3
Q

étape de transgenèse

A

1- choisir gène de choix
2- amplifier gène d’intérêt dans un plasmide (PCR)
3- insérer plasmide dans une bactérie
4- infecter la cellule végétale ou animal avec bactérie
5- sélection sur gélose avec antiobios les bacts ayant intégrées le plasmide

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4
Q

les étapes de la PCR

A
  • dénaturation
  • hybridation
  • élongation
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5
Q

combien d’amorces faut-il

A

une fwd une rev

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6
Q

température adéquate de dénaturation de la Taq

A

72 C

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7
Q

que veut dire PCR

A

polymérisation en chaine

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8
Q

ce qui peut être limitant a la PCR

A
  • dNTPs
  • amorces
  • tampon
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9
Q

que se passe til lors de la dénaturation

A

augmentation de la T= bris des liens H entre les brins complémentaires

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10
Q

que se passe til lors de l’hybridation

A

la température diminue et les amorces se lie à la matrice

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11
Q

que se passe til lors de l’élongation

A

la température est à la température optimale pour l’enzyme polymérase

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12
Q

comment se nomme le produit de PCR

A

amplicon

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13
Q

de quoi dépend le nombre d’amplicon

A

dNTPs dispo (pour polymériser brin)
nbre de cyles
qté réactifs
(2¨n-2n)

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14
Q

définie le polymorphisme

A

présence de plusieurs allèles pour 1 gène dans une population

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15
Q

applications de la PCR

A
  • identification de polymorphisme
  • diagnostic infections
  • diagnostic prénataux
  • analyse de l’expression de gènes
  • mutagenèse
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16
Q

comment on utilise la PCR pour identifier les polymorphismes

A

on observe les différents allèles présents

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17
Q

qPCR

A

quantitatif

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18
Q

RT-PCR

A

qualitatif

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19
Q

que sont les enzymes de restriction

A

des endonucléases

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20
Q

cmb de nucléotides forment le site de restriction

A

4-8 (la plupart sont des palindromes= meme séquence dans les deux sens)

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21
Q

plus il y a de nucléotides sur la séquence de restriction

A

plus il sera rare de la trouver en copie dans l’ADN (plus de chance de fixer la bonne)

22
Q

types de coupure des enzymes de restriction

A
  • franche (extrémité double brin)
  • cohésive (extrémité libre)
23
Q

L’ADN ligase forme quel type de liaison

A

les liens phosphodiesters (relie donc 2 fragments d’ADN)

24
Q

les extrémités cohésives ou franche facilite la liaison?

A

cohésive

25
Q

les extrémités cohésives assurent un clonage comment

A

directionnel= dans un sens

26
Q

est-il important de réutiliser la meme enzyme si l’on veut la meme extrémité

A

oui, ainsi le site de restriction est reproduit

27
Q

quel role joue l’agarose du gel

A

tamis moléculaire (laisse passer les petites)

28
Q

les colorants ajoutés pour visualiser la migration permettent-ils de visualiser l’ADN

A

non, on utilise donc un agent intercalent comme le bromure d’éthidium qui devient fluorescent lorsque exposer aux UV

29
Q

pk il y a parfois des smear

A

plusieurs fragments de taille semblable sont présents

30
Q

L’ADN plasmidique s’observe plus facilement ou difficilement au gel

A

plus facilement, car fragments plus petits= cartographie de restriction

31
Q

quelle est la différence entre le site de restriction et le nbre de fragments produits

A

1- ou l’ADN est clivé
2- selon la PCR, les réactifs

32
Q

que doivent posséder les plasmides bactériens

A
  • origine de réplication
  • marqueur de sélection (gène de résistance)
  • site de multiclonage (permet insertion de fragments de restriction)
33
Q

les résultats possibles de l’enzyme de restriction

A

plasmide non recombiné
Plasmide recombine (YAY)
ADN non recombinant

34
Q

que permet le vecteur de propagation

A

répliquer le vecteur (et l’info qu’il contient) en grande qté

35
Q

le vecteur de propagation sera til transcrit

A

NON

36
Q

le vecteur d’expression sera til transcrits

A

OUI, il possède un promoteur

37
Q

caractéristiques communes aux plasmides

A

origine de réplication (facilite ou ralenti le nbre de copies produites)
sites de multiclonage
marqueur de sélection

38
Q
A
39
Q

fragments à insérer et le plasmide doivent posséder quoi en commun

A

un coupure cohésive compatible ouuu avoir ete coupé avec la meme enzyme

40
Q

comment on nomme la capacité naturelle d’intégrer de l’ADN libre

A

compétence génétique

41
Q

à quoi sert le lacZ

A

choisir les gènes ayant intégré les plasmides recombinés= couleur différence de ceux avec les plasmides non-recombinés (X-gal est bleu et transcrit si gène non inséré= non recombiné)

42
Q

transfo définition

A

insertion gène étranger dans procaryote

43
Q

transfection def

A

insertion gène étranger dans cellule eucaryote

44
Q

transduction

A

transfert ADN dans bactérie par l’entremise de phages (virus)

45
Q

comment on rend une bactérie compétente

A
  • électropo
  • soln cations divalents
  • choc thermique aussi
46
Q

quels sont les deux types de transfection

A
  • transitoire: indépendant du génome
  • stable: intégré au génome
47
Q

quelles sont les séquences qui entourent le gène d’intérêt

A

les border séquences

48
Q

deux types de transfections chez les plantes

A
  • gamètes (transmissible)
  • cals
    BESOIN D’UN MARQUEUR DE SÉLECTION
    possible aussi chez animaux VIA blastocytes
49
Q

CRISPR: quel est son endonucléase

A

Cas 9= endonucléase (qui sert normalement à cliver des virus en suivant un guide d’une infection précédente)

50
Q

comment on utilise CRISPR

A
  • arn guides
  • plasmides
  • plasmides dans Agrobacterium (transfo)
  • transfection dans cellule végétale
  • marqueur de sélection et infection par la bactérie
51
Q

méthode de Sanger

A

ddNTPs modifiés qui ne possèdent pas de OH en position 3’ = pas de liaison phosphoester possible= fin

on connait donc tous les nucléotides complémentaires (séparation par électrophorèse)

BUT: SÉQUENCER UNE GRANDE QTÉ DE PETITS FRAGMENTS

52
Q

à la place de transcrire on fait quoi mtn

A

chromato sur colonne= ddNTP fluorescents= transmission de chaque fluorochrome

Intras (17 decks)

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