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intra bio mol (3) Flashcards

1
Q

définie transgenèse

A

insertion de gène étranger

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Q

deux types de catégories

A

classique (croisement/ mutagène)
génétique (transgénèse/ manipulation)

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3
Q

étape de transgenèse

A

1- choisir gène de choix
2- amplifier gène d’intérêt dans un plasmide (PCR)
3- insérer plasmide dans une bactérie
4- infecter la cellule végétale ou animal avec bactérie
5- sélection sur gélose avec antiobios les bacts ayant intégrées le plasmide

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4
Q

les étapes de la PCR

A
  • dénaturation
  • hybridation
  • élongation
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5
Q

combien d’amorces faut-il

A

une fwd une rev

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6
Q

température adéquate de dénaturation de la Taq

A

72 C

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7
Q

que veut dire PCR

A

polymérisation en chaine

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8
Q

ce qui peut être limitant a la PCR

A
  • dNTPs
  • amorces
  • tampon
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9
Q

que se passe til lors de la dénaturation

A

augmentation de la T= bris des liens H entre les brins complémentaires

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10
Q

que se passe til lors de l’hybridation

A

la température diminue et les amorces se lie à la matrice

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11
Q

que se passe til lors de l’élongation

A

la température est à la température optimale pour l’enzyme polymérase

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12
Q

comment se nomme le produit de PCR

A

amplicon

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13
Q

de quoi dépend le nombre d’amplicon

A

dNTPs dispo (pour polymériser brin)
nbre de cyles
qté réactifs
(2¨n-2n)

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14
Q

définie le polymorphisme

A

présence de plusieurs allèles pour 1 gène dans une population

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15
Q

applications de la PCR

A
  • identification de polymorphisme
  • diagnostic infections
  • diagnostic prénataux
  • analyse de l’expression de gènes
  • mutagenèse
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16
Q

comment on utilise la PCR pour identifier les polymorphismes

A

on observe les différents allèles présents

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17
Q

qPCR

A

quantitatif

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18
Q

RT-PCR

A

qualitatif

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19
Q

que sont les enzymes de restriction

A

des endonucléases

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20
Q

cmb de nucléotides forment le site de restriction

A

4-8 (la plupart sont des palindromes= meme séquence dans les deux sens)

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21
Q

plus il y a de nucléotides sur la séquence de restriction

A

plus il sera rare de la trouver en copie dans l’ADN (plus de chance de fixer la bonne)

22
Q

types de coupure des enzymes de restriction

A
  • franche (extrémité double brin)
  • cohésive (extrémité libre)
23
Q

L’ADN ligase forme quel type de liaison

A

les liens phosphodiesters (relie donc 2 fragments d’ADN)

24
Q

les extrémités cohésives ou franche facilite la liaison?

25
les extrémités cohésives assurent un clonage comment
directionnel= dans un sens
26
est-il important de réutiliser la meme enzyme si l'on veut la meme extrémité
oui, ainsi le site de restriction est reproduit
27
quel role joue l'agarose du gel
tamis moléculaire (laisse passer les petites)
28
les colorants ajoutés pour visualiser la migration permettent-ils de visualiser l'ADN
non, on utilise donc un agent intercalent comme le bromure d'éthidium qui devient fluorescent lorsque exposer aux UV
29
pk il y a parfois des smear
plusieurs fragments de taille semblable sont présents
30
L'ADN plasmidique s'observe plus facilement ou difficilement au gel
plus facilement, car fragments plus petits= cartographie de restriction
31
quelle est la différence entre le site de restriction et le nbre de fragments produits
1- ou l'ADN est clivé 2- selon la PCR, les réactifs
32
que doivent posséder les plasmides bactériens
- origine de réplication - marqueur de sélection (gène de résistance) - site de multiclonage (permet insertion de fragments de restriction)
33
les résultats possibles de l'enzyme de restriction
plasmide non recombiné Plasmide recombine (YAY) ADN non recombinant
34
que permet le vecteur de propagation
répliquer le vecteur (et l'info qu'il contient) en grande qté
35
le vecteur de propagation sera til transcrit
NON
36
le vecteur d'expression sera til transcrits
OUI, il possède un promoteur
37
caractéristiques communes aux plasmides
origine de réplication (facilite ou ralenti le nbre de copies produites) sites de multiclonage marqueur de sélection
38
39
fragments à insérer et le plasmide doivent posséder quoi en commun
un coupure cohésive compatible ouuu avoir ete coupé avec la meme enzyme
40
comment on nomme la capacité naturelle d'intégrer de l'ADN libre
compétence génétique
41
à quoi sert le lacZ
choisir les gènes ayant intégré les plasmides recombinés= couleur différence de ceux avec les plasmides non-recombinés (X-gal est bleu et transcrit si gène non inséré= non recombiné)
42
transfo définition
insertion gène étranger dans procaryote
43
transfection def
insertion gène étranger dans cellule eucaryote
44
transduction
transfert ADN dans bactérie par l'entremise de phages (virus)
45
comment on rend une bactérie compétente
- électropo - soln cations divalents - choc thermique aussi
46
quels sont les deux types de transfection
- transitoire: indépendant du génome - stable: intégré au génome
47
quelles sont les séquences qui entourent le gène d'intérêt
les border séquences
48
deux types de transfections chez les plantes
- gamètes (transmissible) - cals BESOIN D'UN MARQUEUR DE SÉLECTION possible aussi chez animaux VIA blastocytes
49
CRISPR: quel est son endonucléase
Cas 9= endonucléase (qui sert normalement à cliver des virus en suivant un guide d'une infection précédente)
50
comment on utilise CRISPR
- arn guides - plasmides - plasmides dans Agrobacterium (transfo) - transfection dans cellule végétale - marqueur de sélection et infection par la bactérie
51
méthode de Sanger
ddNTPs modifiés qui ne possèdent pas de OH en position 3' = pas de liaison phosphoester possible= fin on connait donc tous les nucléotides complémentaires (séparation par électrophorèse) BUT: SÉQUENCER UNE GRANDE QTÉ DE PETITS FRAGMENTS
52
à la place de transcrire on fait quoi mtn
chromato sur colonne= ddNTP fluorescents= transmission de chaque fluorochrome

Intras (17 decks)

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