Hibridación de ácidos nucleicos

Question 1

¿Qué es una hibridación?

Answer 1

Forma de detectar secuencias específicas de nucleótidos empleando sondas (material genético) marcadas

Question 2

¿Cuál es el origen de los ácidos nucleicos de una hibridación?

Answer 2

Proceden de fuentes diferentes, que previamente no formaban una doble cadena

Question 3

5 tipos de hibridación

Answer 3

• Hibridación in situ (FISH)
• Southern blot (ADN)
• Northern blot (ARN)
• Dot blot
• Hibridación de colonias o placas

Question 4

Flouresecent in situ hybridization (FISH)

Answer 4

• Técnica de marcaje de cromosomas que permite mapear la ubicación de diferentes secuencias a lo largo de secuencias únicas de ADN mediante la hibridación de sondas que emiten flourescencia
• Desarrollada inicialmente con marca radioactiva
• Se realiza cuando se sospecha de una anormalidad cromosómica en algún síndrome concreto
• Permite localizar la expresión génica en un tejido

Question 5

Características del FISH

Answer 5

• Se usa en la metafase cuando los cromosomas están condensados
• Normalmente la secuencia que se busca está en regiones teloméricas o centroméricas
• El portaobjetos es tratado con solución salina caliente para desnaturalizar el ADN y que sea monocatenario
• Se incuba el ADN con sonda de ADN biotinilado y se lava para eliminar el ADN no hibridado
• Se vuleve a incubar con avidina marcada con fluorescencia para revelar la ubicación de la sonda de ADN marcada
• El ADN biotinilado reconoce la secuencia formada de avidina
• La contratinción de los cromosomas hace que aparezcan de color rojo (ioduro de propidio)

Question 6

¿Cuáles son los tipos de sondas?

Answer 6

• Específicas de locus
• Fusión dual
• Doble color para ruptura
• Centroméricas (satélites)
• Teloméricas

Question 7

¿Para qué situaciones se usarían las sondas de locus específicos?

Answer 7

• Anomalías cromosómicas numéricas (aneuploidías)
• Región cromosómica única
• Anomalías cromosómicas estructurales

Question 8

¿Qué es una monosomía y una trisomía?

Answer 8

Monosomía: falta uno de los cromosomas de un par
Trisomía: más de 2 cromosomas en lugar de un par

Question 9

¿Qué se debería de ver en la imagen del microscopio normalmente los cromosomas?

Answer 9

2 señales por núcelo

Question 10

¿Qué es una deleción y una duplicación?

Answer 10

Deleción: se pierde o elimina parte del cromosoma
Duplicación: se duplica parte del cromosoma

Question 11

¿Qué se debería de ver en la imagen del microscopio normalmente una deleción y una duplicación ?

Answer 11

1 señal o más de 2 señales

Question 12

Sonda de fusión dual

Answer 12

• Se unen a regiones continguas al punto de translocación
• Será observada como una señal conjunta
• Se usa en casos de translocación

Question 13

¿Qué es translocación?

Answer 13

Anomalía cromosómica estructural en la que se transifere una parte de un cromosoma a otro

Question 14

Sonda de doble color para ruptura

Answer 14

• Revelan eventos de translocación
• Se unen al cromosoma intacto flanqueando el punto de ruptura
• Cuando pasa la translocación, la sonda se separa

Question 15

Sonda centromérica o satélite

Answer 15

• Hibridan en regiones repetidas que rodean los centrómeros
• Detectan aneuplodía de cualquier cromosoma

Question 16

Sonda telomérica

Answer 16

• Identifican pequeñas deleciones o translocaciones que no fáciles de visualizar en un cariotipo
• Tienden a unirse y pueden formar un cromosoma con 2 telómeros, alterando la variablidad génica

Question 17

Objetivo de una Southern y Nothern blot

Answer 17

Identificar secuencias de interés en el ácido nucleico inmovilizado en una matriz de papel, nylon o nitrocelulosa

Question 18

¿Cómo puede ser la transferencia en una Southern y Northern blot?

Answer 18

Pasiva o electrotransferencia

Question 19

¿Qué se utiliza como marca en una sonda marcada o acoplada a una etiqueta?

Answer 19

• Fósforo radioactivo (32)
• Digoxigenina (DIG)

Question 20

Digoxigenina

Answer 20

• Anticuerpos específicos αDIG
• Anticuerpo acoplado a fosfatasa alcalina
• Sustrato quimioluminiscente

Question 21

¿Cuáles de las siguientes pruebas sirve para el análisis de 1 o pocos genes a la vez?
a) Northern blot
b) Microarreglos
c) RT-qPCR

Answer 21

a) Northern blot
c) RT-qPCR

Question 22

¿Cuáles de las siguientes pruebas sirve para el análisis de decenas, ciento o miles de genes al mismo tiempo?
a) Northern blot
b) Microarreglos
c) RT-qPCR

Answer 22

b) Microarreglos

Question 23

Características de un Dot blot

Answer 23

• NO usa electroforesis
• Útil para ADN y ARN
• Las muestras se aplican con un capilar en la membrana directamente
• Permite analizar de forma rápida la presencia de una secuencia específica en una muestra determinada

Question 24

Características de una hibridación de colonias o placas

Answer 24

• La membrana se pone en contacto con las colonias
• La membrana se trata de forma que se promueve que el ADN o ARN quede expuesto y pueda hibridar con la sonda marcada
• La colonia identificada puede ser resembrada y expandida