GELFI - Parte 2 Flashcards

1
Q

Cosa è l’EMOGLOBINA e quali sono le sue principali caratteristiche?

A

L’EMOGLOBINA è una PROTEINA GLOBULARE presente nei GLOBULI ROSSI con la funzione di TRASPORTARE l’OSSIGENO nel sangue:

1) È TETRAMERICA = 4 subunità polipeptidiche

2) Ne esistono DOVERSI TIPI normali:

  • HbA (α2β2)
  • HbF (α2γ2)
  • HbA2 (α2δ2)

3) OGNI SUBUNITA’ lega un GRUPPO EME, e OGNI EME lega una molecola di FERRO

4) GENI codificanti –> sui cromosomi 11 e 16

5) DOSATA con spettrofotometro a 575 nm (OSSIEMOGLOBINA)

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2
Q

Cosa sono le EMOGLOBINOPATIE e come si manifestano?

A

Le EMOGLOBINOPATIE sono il DIFETTO MONOGENICO RECESSIVO (mutazione) più frequente:

1) SICKLING RED CELL DISORDERS (es. ANEMIA FALCIFORME)

2) ANEMIA EMOLITICA = diminuzione dell’emivita dei globuli rossi

3) POLICITEMIA = aumento del volume di globuli rossi

Esistono 950+ varianti (MUTAZIONI) con grado di severità variabile e che possono causare:

  • ALTERAZIONE QUANTITATIVA della SINTESI (diminuzione o assenza di catene globiniche α o β responsabili di talassemia)
  • PERSISTENZA ereditaria di EMOGLOBINA FETALE (HPFH)
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3
Q

Quali sono le principali TECNICHE MOLECOLARI per la DIAGNOSI delle EMOGLOBINOPATIE?

A

Le principali tecniche molecolari per la diagnosi delle emoglobinopatie includono:

1) GAP-PCR
–> semplice, rapida e poco costosa, solo per DELEZIONI con PUNTO di ROTTURA NOTO

2) MLPA = Ligazioni Multiple dipendenti dall’Amplificazione del Probe

3) SEQUENZIAMENTO automatico

4) aCGH = Array comparative genome hybridization

5) MICROARRAY per delezioni e inserzioni NOTE

6) SOUTHERN BLOTTING –> delezioni GRANDI

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4
Q

Cosa sono le TALASSEMIE e come si manifestano?

A

Le TALASSEMIE sono patologie caratterizzate da un DIFETTO di SINTESI delle CATENE globiniche. Possono essere:

  • α+ o α0: difetti nelle catene ALFA
  • β+ e β0: difetti nelle catene BETA

Le caratteristiche principali includono:

1) SEVERITA’ VARIABILE
–> da asintomatico (portatore) a pazienti con anemia e trasfusione-dipendenti

2) DIMINUITA VELOCITA’ di SINTESI delle catene globiniche

3) MANIFESTAZIONI SECONDARIE
–> dovute allo sbilancio del rapporto α/β, inducendo una ERITROPOIESI INEFFICIENTE

4) All’EMOCROMO:

  • eritrociti aumentatI
  • Hb normale o leggermente diminuita
  • DIMINUITO volume corpuscolare medio (MCV) <79fl
  • DIMINUITA emoglobina corpuscolare media (MCH) <27pg
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5
Q

Quali sono i principali METODI DIAGNOSTICI per le TALASSEMIE?

A

I principali METODI diagnostici per le talassemie includono:

1) EMOCROMO e STRICSCIO di sangue

2) SEPARAZIONE e quantizzazione delle FRAZIONI Hb con:
- HPLC
- Elettroforesi su acetato di cellulosa a pH alcalino (CAE)
- Elettroforesi in gel d’agarosio a pH acido
- Elettroforesi capillare (CE)
- Isoelettrofocalizzazione (IEF)

3) ANALISI del DNA:

  • PCR o RT-PCR
  • Reverse blot hybridization
  • Gap-PCR
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6
Q

Cosa è lo ZINCOPROTOPORFIRINA ERITROCITARIA e come viene utilizzata nella diagnostica?

A

La ZINCOPROTOPORFIRINA eritrocitaria (ZPP) è un MARCATORE legato ad uno scarso uso del Fe nella produzione dell’EME. Viene utilizzata come test di SCREENING per:

  • AVVELENAMENTO da PPIOMBO (aumenta la zincoprotoporfina)
  • Esposizione al Vanadio
  • Carenza di ferro
  • Anemia falciforme
  • Anemia sideroblastica
  • Anemia da malattia cronica

Il dosaggio viene effettuato su UNA GOCCIA di SANGUE utilizzando un EMATOFLUORIMETRO, dove misura direttamente:

  • la fluorescenza della Zincoprotoporfirina
  • l’assorbanza di Hb nel sangue intero (575nm)

VALORI NORMALI = 50 molecole di ZnPP per 1x10^6 molecole di emoglobina.

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7
Q

Cosa è la BILIRUBINA e come viene METABOLIZZATA?

A

La BILIRUBINA è un prodotto di DEGRADAZIONE dell’EMOGLOBINA. Il suo METABOLISMO include:

1) PRODUZIONE
–> 250-300 mg/24h perlopiù dalla distruzione degli eritrociti vecchi

2) TRASPORTO
–> legata all’ALBUMINA nel sangue (bilirubina INDIRETTA o NON-CONIUGATA)

3) CONIUGAZIONE nel FEGATO
–> solubilizzata, ovvero trasformata in bilirubina DIRETTA o CONIUGATA ad opera dell’enzima GLUCURONIL-TRANSFERASI

4) ESCREZIONE
–> nella BILE prima, e poi nelle FECI come STERCOBILINA

5) CIRCOLO ENTEROEPATICO
–> una parte del BILINOGENO viene RIASSORBITO dall’intestino e torna al fegato

VALORI NORMALI di BILIRUBINA:

  • Bilirubina TOTALE = 0.3-1.0 mg/dl
  • Bilirubina DIRETTA= 0.0-0.4 mg/dl
  • Bilirubina INDIRETTA = 0.1-1.0 mg/dl
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8
Q

Quali sono le principali CAUSE di IPERBILIRUBINEMIA?

A

Le principali CAUSE di IPERBILIRUBINEMIA includono:

1) AUMENTO della bilirubina NON CONIUGATA (indiretta):

  • ECCESSIVA PRODUZIONE di bilirubina
  • Riassorbimento di sangue da EMORRAGIA INTERNA
  • Sindromi da ERITROPOIESI INEFFICIENTE
  • RIDOTTA CAPTAZIONE epatica
  • MANCATA CONIUGAZIONE della bilirubina (es. Sindrome di Gilbert, deficit congenito di glucuroniltransferasi)

2) AUMENTO della bilirubina CONIUGATA (diretta):

  • Difetto EPATOCELLUARE di ESCREZIONE (es. Sindrome di Dubin-Johnson e di Rotor)
  • ALTERATA ESCREZIONE per COLESTASI intra o extra-epatica
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9
Q

Come si misura la BILIRUBINA e quali sono i METODI di DOSAGGIO?

A

La bilirubina viene misurata principalmente attraverso il METODO di VAN DER BERGH
–> reazione tra la bilirubina e lo IONE DIAZONICO dell’ACIDO SULFANILICO a formare AZODERIVATI

I metodi di DOSAGGIO includono:

1) Metodo FOTOMETRICO: misura gli AZODERIVATI ottenuti dalla reazione di Van der Bergh

  • BILIRUBINA DIRETTA = reagisce direttamente con lo ione diazonio
  • BILIRUBINA INDIRETTA = reagisce con lo ione diazonio solo se solubilizzata in alcoli o altri solventi

4) FOTOMETRIA di RIFLETTANZA
–> sulla PELLE del paziente o su uno STRATO SOTTILE di SANGUE (utilizzata principalmente nei NEONATI)

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10
Q

Cosa è l’UROBILINOGENO e come viene utilizzato nella DIAGNOSI delle patologie epatiche?

A

L’UROBILINOGENO è un prodotto del METABOLISMO della BILIRUBINA, in parte:

  • RIASSORBITO dall’INTESTINO
  • ESCRETO nelle URINE

1) La sua PRESENZA nelle URINE è indicativa di:

  • ECCESSO di PIGMENTI BILIARI che arrivano all’intestino
  • INCAPACITA’ da parte della cellula epatica danneggiata di RISECERNERE il bilinogeno

2) ASSENZA COMPLETA di urobilinogeno nelle urine:

–> nella COLESTASI COMPLETA, mentre ESCLUDE la diagnosi di OSTRUZIONE BILIARE COMPLETA.

L’UROBILINOGENO aumenta in condizioni come:

  • Ittero emolitico, trasfusioni incompatibili
  • Danno epatocellulare
  • Contaminazione batterica delle vie biliari
  • Febbre
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