Enzymologie pt. II Flashcards
cours du 7.01
Les deux méthodes de linéarisation de la formule de Michaelis-Mentel?
→ de Lineweaver-Burk (ou méthode des doubles inverses)
1/Vi = (Km + [S])/(Vmax . [S]) → 1/Vi= (Km)/( Vmax [S]) + 1/Vmax
→ de Eadie-Hofstee: Vi= -Km x (Vi/[S]) + Vmax.
Le Km: Unité? Définition? Formule? Que permet-il?
→ Unité: concentration (mole/L)
→ [S] pour laquelle la moitié des sites actifs sont occupés et pour laquelle Vi=Vmax/2
→ (k2+k3)/k1 Si k3<
La Vmax: unité? à quoi correspond-elle?
Unité: Mole par unité de temps
Vitesse quand E est Saturée en S, quand [S] est 20 fois supérieure au Km
La kcat: unité et à quoi correspond-elle?
Unité: sec-1
Nombre maximal de molécules de S transformées en P par 1 molécule d’E car seconde, quand E est saturée en S
«Turn Over» de l’E, mesure l’activité catalytique de l’E
Combien environ vaut la kcat?
Kcat env = 10² à 10⁶ sec⁻¹
Que mesurent la kcat et le Km IN VIVO?
Kcat/Km mesure l’efficacité catalytique, caractéristique de E in vivo.
In vivo, quelle est la proportion de S par rapport à E?
Dans les milieux biologiques in vivo, on n’est jamais dans des concentrations saturantes en substrat: [S]«< Km et [Et]=[E] (avec E l’enzyme libre et Et l’enzyme totale)
Rapport kcat/Km?
Vi= kcat [Et]. ([S]/Km+[S])
En quelles unité le résultat du dosage d’une enzyme peuvent-ils être exprimés?
→ En Katal (Système Inter): quantité d’E qui transforme une mole de S par seconde → Katal/L
→ En Unités Internationales (fait pas partie du système inter!) Qtté d’E qui transforme une MICROmole par minute → UI/L
pH des enzymes normal?
7
Quelques exceptions de pH chez les enzymes?
- Enzymes lysosomales pH = 4,5
- Pepsine pH = 2-3
- Amylase pancréatique pH= 7
- Trypsine pH= 9
Définition d’effecteurs chimiques?
Molécule qui, par sa liaison à l’enzyme, modifie la vitesse de réaction de l’enzyme.
Les catégories d’effecteurs chimiques?
- Activateurs
* Inhibiteurs (réversibles irréversibles)
Les types d’activateurs?
- Ions métalliques
- Co-enzymes
Caractéristiques des ions métalliques?
– Éléments du site actif, nécessaire à la catalyse
– Facilement séparables
Un exemple d’ions métalliques?
kinases activées par le Mg²⁺
Caractéristiques des co-enzymes?
– Soit fixé de façon étroite à l’E = groupe prosthétique
– Soit labile = co-substrat
Quelques exemples de co-enzymes?
– coE nicotiniques: NAD⁺/NADH: Nicotinamide Adénine Dinucléotide (dérivé de Vitamine B3)
– coE flaviniques: FAD/FADH2 Flavine Adénine Dinucléotide (dérivé de Vitamine B2)
– Phosphate de pyridoxal (PLP) (Vit. B6)
– Folates (DHF, THF…) (Vit B9)
De quoi dérivent de nombreuses co-enzymes?
de vitamines
Caractéristiques des inhibiteurs?
→ Petites molécules spécifiques.
→ Entité I qui diminue la vitesse de réaction enzymatique V0 i
Rôles des inhibiteurs dans les milieux biologiques (in vivo)?
- Contrôle de l’activité enzymatique (régulation)
- Médicaments
- Substances toxiques
Roles des inhibiteurs en recherche (in vitro)?
→ Outils d’étude
- Rôles de l’E, du S et du P
Formule de la constante d’inhibitipn?
Ki constante d’inhibition = K+i/K-i
Caractéristiques des inhibiteurs irréversibles?
– Liaison covalente (ou non) STABLE de I à E
– Inactivation définitive de l’enzyme
Deux exemples d’inhibiteurs irréversibles?
→ activation de l’aspirine (acide acétique salicylique): Ser 530 et Arg 120 se chargent de l’inhibition
→ Les bêta-lactanin
Caractéristiuqes des bêta-lactinine?
– classe d’antibiotiques,
– inhibent la formation du peptidoglycane (assemblage des peptides)
– Structure commune: il y a un COOH, unefonction cétone et un amide N - C = O
Dans la méthode de linéarisation de lineweaver-burk, où la courbe coupe-t-elle l’axe des abcisses? Et des ordonnées?
Axe des abcisses en -1/Km
Axe de sordonnées en 1/Vmax
Que vaut la pente dans la linéarisation de Lineweaver-Burk?
Km/Vmax
