Buisine 6 Flashcards

1
Q

De quoi a-t-on besoin pour un séquençage par méthode de Sanger?

A

◦ ADN: fragment d’ADN amplifié
◦ Amorce: oligonucléotide
◦ Désoxyribonucléotides (dATP, dGTP, dTTP, dCTP)→ ptite qtté de dNTP marqués par un fluorochrome
◦ 1% de DIDESOXYRIBONUCLEOTIDES (ddATP, ddGTP, etc.) (-)
◦ Poly: Taq ADN poly
◦ Solution tampon

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Q

Processus du séquençage par méthode de Sanger?

A

• Termocycleur:
1. Dénaturation de l’ADN (95°C)
2. Hybridation de l’amorce (50-55°C)
3. Elongation par la Taq poly 60-70°C
• Séparation des fragments par électrophorèse en gel de polyacrylamide (séquenceur d’ADN)

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3
Q

Que sont les nouvelles techniques de séquençage NGS?

A
  • après 2005
  • Séquençage simultané d’un très grand nombre de fragments d’ADN (plusieurs millions en qqes h) = séquençage haut débit
  • Innovations technologiques: enzymes modifiées…
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4
Q

Quelles sont les applications des techniques de séquençage?

A
  • Analyses génomiques: séquençage de qqes gènes, de tout l’exome ou du génome complet
  • Analyses transcriptomiques: séquençage des ARNm, ARN non codants
  • Analyse de modifications épigénétiques: séquençage de l’ADN méthylé, des domaines d’interaction…
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5
Q

Quels sont les avantages des techniques de séquençage?

A
  • Séquençage simultané d’un très grand nbr de fragments d’ADN
  • Grande sensibilité de détection
  • Capacité à détecter des variations de séquence et des anomalies structurales
  • Temps d’analyse de + en + court
  • Coût de + en + faible
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6
Q

Quelles sont les limites des techniques de séquençage?

A
  • Qtté de données +++→ problèmes pour le traitement et le stockage, interprétation: informatique, (bio)informatique
  • Problèmes éthiques…
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7
Q

Quel est le gène en cause de la mucoviscidose?

A

gène CFTR
• Chr 7, 27 exons
• → protéine CFTR (1480 AA)→ canal Cl⁻

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8
Q

Quelle est la mutation la plus fréquence en cause de la mucoviscidose?

A

Mutation delta F508
• Délétion de 3 nt dans l’exon 10
• → délétion d’une phénylalanine en position 508

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9
Q

Comment recherche-t-on la mutation delta F508?

A

Amplification par PCR et analyse par électrophorèse en gel de polyacrylamide

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10
Q

En quoi consiste la recherche des mutations fréquentes par ARMS ou ASA?

A

= amplification spécifique d’allèle

• PCR à l’aide d’amorces spécifiques d’allèles (séquence normale/mutée) et analyse par électrophorèse

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11
Q

Quel gène est en cause de l’hémochromatose?

A

gène HFE
• localisé sur chr 6, contient 6 exons
• → prot HFE (348 AA): rôle dans la réguation de l’absorption du fer
• défaut de la protéine→ accumulation de fer dans les tissus
• → douleurs articulaires et abdominales, diabète, fibrose hépatique

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12
Q

Quelle est la mutation la + fréquence en cause de l’hémochromatose?

A

mutation C282Y

• Substitution G→ A dans l’exon 4

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13
Q

Comment se passe la recherche de la mutation C282Y?

A

Recherche de cette mutation par PCR-RFLP

• La mutation fait apparaître un nouveau site de restriction enzymatique pour l’endonucléase de restriction Rsa1

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14
Q

Quelles sont les applications du typage génétique par analyse de microsatellites?

A

DNP (contamination maternelle), tests de paternité, analyses médico-légales…

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15
Q

Quel est le principe du typage génétique par analyse de microsatellites?

A
  • Analyses de microsatellites polymorphes

* Amplification par PCR et électrophorèse en gel de polyacrylamide

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16
Q

Quel type de maladie est la mucoviscidose?

A

Héréditaire RECESSIVE