cours 4 mcb2399

Question 1

caractéristiques PCR

Answer 1

• amplifier segment spécifique ADN ou ARN à partir amorces
• amorces 15 à 25 nt
• rapide
• produit grande quantité

Question 2

quelle étape est nécessaire pour amplification par PCR avec ARN

Answer 2

ARN en ADN par RT reverse transcriptase

Question 3

quel est le contenu général d’un mélange réactionnel pour PCR

Answer 3

ADN
amorces
dNTP
Tap pol

Question 4

quels sont les liens entre les nt des 2 brins d’ADN

Answer 4

liens H (liens faibles)

Question 5

qu’est-ce que le Tm

Answer 5

température fusion moléculaire à laquelle 50% molécules sont hybridées-séparées
spécifique à chaque séquence ADN

Question 6

que doit-on faire pour améliorer la spécificité d’un PCR

Answer 6

augmente longeur des amorces

Question 7

pourquoi est-ce important de tenir compte des Tm des deux amorces

Answer 7

• chaque amorce a son Tm: besoin d’un max de 5 degré de différence
• si mauvaise température: peut avoir mismatch: amorce va s’hybrider à un endroit pas 100% homologue

Question 8

à quoi ç sert de mettre un excès d’amorces

Answer 8

plus de chances hybridation amorce-ADN et empêche ADN de s’hybrider avec lui-même

Question 9

un PCR augmente de quelle façon quand on fait plusieurs cycle

Answer 9

exponentielle (2^x)

Question 10

quand on fait un PCR est-ce vraiment une progression exponentielle

Answer 10

non fait un plateau
- réactifs épuisés
- polymérase endommagée

Question 11

quelles sont les applications du PCR

Answer 11

• recherche
• médecine légale
• diagnostic maladies héréditaires
• détection cancer
• classification organismes
• détection pathogènes

Question 12

qu’est-ce qu’un PCR niché

Answer 12

2 amplifications
1. avec amorces externes: en dehors de la séq recherchée
2. amorces internes

Question 13

avantages et inconvénients du PCR niché

Answer 13

+: augmentation sensibilité et spécificité
-: risque contaminations et faux positifs