cours 3 mcb2399

Question 1

qu’est-ce que TAAN

Answer 1

test amplification d’acides nucléique

Question 1

quels sont les différentes catégories de TAAN

Answer 1

• amplification signal
• amplification sonde
• amplification cible

Question 2

quelles sont les méthodes d’amplification de signal

Answer 2

• branched DNA
• hybrid capture

Question 3

quelles sont les méthodes d’amplification de sonde

Answer 3

• invader
• ligase amplification

Question 4

quel est l’avantage d’amplification de signal ou de sonde

Answer 4

risque de contamination nul

Question 5

quels sont les avantages de la ligase amplification (chain reaction)

Answer 5

• utile pour analyse mutations ponctuelles
• plus spécifique que PCR
• dépistage chlamydia et gonorrhée
• génotypage VIH

Question 6

comment fonctionne la méthode ligase amplification (chain reaction)

Answer 6

• contient 4 amorces/sondes
• chauffage pour séparer brins ADN
• refroidir pour renaturer et lier sondes
• ligase lient 2 paires d’amorce si compatible

si ADN pas complémentaire aux amorces: pas de ligation-> pas amplification

Question 7

à quoi sert les quencher

Answer 7

aide à faire la différence entre niveau expression de fluorescence basal vs niveau expression fluorescence amplifié

Question 8

que permet le Gap-LCR (ligase amplication)

Answer 8

• spécificité augmentée
• bruit de fond diminué

sondes ne sont pas exactement à côté: besoin ADN pol pour remplir le trou

ensuite agit comme LCR

Question 9

qu’est-ce que le MLPA

Answer 9

multiplex ligation dependent proble amplification

possède site (en 5’ et 3’) pour accrocher amorces pour PCR

et séquence stuffer: permet étudier plusieurs gènes en même temps

plusieurs gènes: même amorces mais stuffer de différentes longueurs pour différencier gènes

Question 10

à quoi peut servir MLPA-LCR

Answer 10

détection cancer colon, dystrophie musculaire

Question 11

comment fonctionne la détection de cancer par discrimination allélique avec MLPA-LCR

Answer 11

approche inversée: s’il n’y a pas la mutation: sonde ne va pas être lier

sonde complémentaire à mutation cancéreuse

Question 12

caractéristiques de SDA par amplification de cible

Answer 12

strand displacement amplification
- isotherme
- spécifique (2paires amorces)
- pour détecter pathogènes
- détection par ELISA, fluorescence, électrophorèse

Question 13

qu’est-ce que LAMP

Answer 13

loop mediated isothermal amplification (type de SDA)
- polymérase s’associe aux amorces et déplace brin ADN
- fait un ou quelques échantillons à la fois

Question 14

comment fonctionne le LAMP

Answer 14

???

Question 15

qu’est-ce que NASBA/TAM

Answer 15

nucleic acid sequenced-based amplification/transcription-mediated amplification

Question 16

comment fonctionnne NASBA/TAM

Answer 16

• surtout pour ARN
• ARN en ADN et copies d’ARN à partir de l’ADN

pour NASBA: enzyme supplémentaire RNAse H pour dégrader brin ARN

Question 17

quel est l’avantage de NASBA/TAM

Answer 17

amplification ARN élimine contagion par ADN si but est de déterminer expression des gènes

Question 18

inconvénient de TAM

Answer 18

1 échantillon à la fois

Question 19

étapes amplification chez TAM

Answer 19

• amorce avec promoteur lie ARN
• transcriptase inverse fait ADN
• RNase ou RT dégrade ARN
• ajout 2e amorce: RT crée 2e brin ADN
• avec amorces ARN pol T7 crée des copies ARN de l’ADN