CM9 : Vésicules extra cellulaires

Question 1

Définition d’un biomarqueur ?

Answer 1

Toute substance, structure ou processus pouvant être mesurés dans le corps humain ou les
matrices biologiques, susceptibles d’influencer ou de prédire l’incidence ou l’apparition d’une maladie

Question 2

Que peut ê un biomarqueur dans le domaine médical ?

Answer 2

o Quantitatif
o Qualitatif
o Utilisé pour
* Pour un dépistage médical
* Pr un diagnostic
* Pr le suivi d’un ttt médical

Question 3

Que peut ê un biomarqueur dans le domaines des contaminants ?

Answer 3

o D’exposition
o D’effet
o De sensibilité ou de susceptibilité

Question 4

Que doit ê un biomarqueur et les technologies qui l’accompagne ?

Answer 4

o Sensible
o Spécifique
o Rapide
o Économique

Question 5

Caractéristiques des vésicules extra cellulaires ?

Answer 5

• Produites par toutes les cellules
• Présentes dans les fluides biologiques,
• Nanostructures closes avec bicouche lipidique
• Ne peuvent pas se répliquer
• Représentent des systèmes d’échange de messages
  multimoléculaires
• Ont une composition étroitement liée à la nature et au statut des cellules d’origine

Question 6

Quelles peuvent ê les vésicules extracellulaires (VE) ?

Answer 6

• Microvésicules (MV ou large EV)
• Exosomes (EXO ou small EV)
• Corps apoptotiques

Question 7

Caractéristiques des MV ?

Answer 7

o Bourgeonnement de la membrane plasmique
o Pas de destruction de la C
o Taille < à 1000nm de diamètre

Question 8

Caractéristiques des exosomes ?

Answer 8

• Petite taille, moins de 200nm
• A partir des endosomes dans lesquels apparaissent les petites vésicules intraliminales (ILV) par invagination

Question 9

Que sont les corps multivésiculaires ?

Answer 9

Endosomes + ILV = corps
multivésiculaires

Question 10

Caractéristiques des corps apoptotiques ?

Answer 10

o Produits lors de l’apoptose
o Svt + grands (>1 000 nm)
o Produites avec destruction de la C
o Contiennent du matériel nucléaire, des histones et des fragments d’organites cellulaires

Question 11

Caractéristiques des exomères ?

Answer 11

o Très petites : 30-50 nm
o pas de bicouche lipidique => pas des VE
o Processus de biogenèse peu connu
o Possiblement issus des organites intracellulaires
o + rigides
o Capables de fusionner facilement avec les cellules de
la moelle osseuse ou du foie

Question 12

Quelles sont les différentes technique d’isolement des VE ?

Answer 12

o Par précipitation,
o Par colonne d’exclusion,
o Sur gradient de densité
o Par chromatographie d’exclusion
o Par immuno-capture

Question 13

Quelle est la technique d’isolement les plus utilises avec les VE ?

Answer 13

Ultracentrifugation

Question 14

Comment se fait la caractérisation des VE ?

Answer 14

1- Vérification de leurs morphologies
2- Démontrer la présence de marqueurs spécifiques : Prot transmembranaire, prot associées aux lipides membranaire, Prot cytosolique présentes dans VE
3- Vérifier le degré de pureté : vérifier niveau de présence de marqueurs de
lipoprotéines, vérifier le niveau de présence de marqueurs nucléiques

Question 15

Principe de l’analyse de suivi des nanoparticules ?

Answer 15

Laser éclaire la particule => lumière diffractée capturée à l’aide d’une caméra CCD => particule est suivie durant quelque seconde => Distance parcourue est liée à un diamètre hydrodynamique

Question 16

Biogénèse des exosomes ?

Answer 16

Débute par une endocytose => vésicules d’endocytose internalisées fusionnent avec endosomes précoces => maturation des endosomes précoces => tardifs => permet accumulation des ILV dans la lumière
de l’endosome => MVB : 2 destinées possibles : 1) fusion avec les lysosomes
2) fusion avec la membrane plasmique

Question 17

Que sont les ESCRT ?

Answer 17

Endosomal Sorting Complex Required for
Transport : Protéines assemblées en quatre complexes : ESCRT 0, I, II, III

Question 18

Quelles sont les protéines associées au ESCRT ?

Answer 18

• VSP4
• Alix
• VAT1
• TSG101

Question 19

Propriétés des tétraspanines ?

Answer 19

Capacité d’interagir avec nbreuses
prot au sein de microdomaines

Question 20

Rôles des lipides pour les VE ?

Answer 20

o impliquerait la synthèse des céramides
o Sphingomyélinase neutre => hydrolyse sphingomyéline en céramide
o Les céramide génère des sous-domaines membranaires

Question 21

Mécanisme de biogénèse des microvésicules ?

Answer 21

o Mobilisation d’enzymes contrôlant l’asymétrie des
phospholipides membranaires
o Perte de l’asymétrie membranaire = excès de charge
négative à la surface de la membrane plasmique => courbure de la membrane + réorganisation du
cytosquelette => formation + libération des MV

Question 22

Libération des MV ?

Answer 22

o par fission
o Dépend de la présence de protéine ESCRT
o Dépend de l’interaction de l’actine et de la myosine

Question 23

Composition des VE ?

Answer 23

• Grand nb de molécules à leur surface, dans leur
  membrane ou à l’intérieur
• Très haut niveau de complexité
• Constituants dépendant :
  o du type cellulaire
  o du stimulus
  o de l’état physiologique ou physiopathologique de la C productrice
• VE peuvent aussi contenir des organites entiers => uniquement MV = mitochondries
  o Existe des composants «marqueurs»
  o Utilisés pour leur caractérisation