CM9 : Vésicules extra cellulaires Flashcards
Définition d’un biomarqueur ?
Toute substance, structure ou processus pouvant être mesurés dans le corps humain ou les
matrices biologiques, susceptibles d’influencer ou de prédire l’incidence ou l’apparition d’une maladie
Que peut ê un biomarqueur dans le domaine médical ?
o Quantitatif
o Qualitatif
o Utilisé pour
* Pour un dépistage médical
* Pr un diagnostic
* Pr le suivi d’un ttt médical
Que peut ê un biomarqueur dans le domaines des contaminants ?
o D’exposition
o D’effet
o De sensibilité ou de susceptibilité
Que doit ê un biomarqueur et les technologies qui l’accompagne ?
o Sensible
o Spécifique
o Rapide
o Économique
Caractéristiques des vésicules extra cellulaires ?
- Produites par toutes les cellules
- Présentes dans les fluides biologiques,
- Nanostructures closes avec bicouche lipidique
- Ne peuvent pas se répliquer
- Représentent des systèmes d’échange de messages
multimoléculaires - Ont une composition étroitement liée à la nature et au statut des cellules d’origine
Quelles peuvent ê les vésicules extracellulaires (VE) ?
- Microvésicules (MV ou large EV)
- Exosomes (EXO ou small EV)
- Corps apoptotiques
Caractéristiques des MV ?
o Bourgeonnement de la membrane plasmique
o Pas de destruction de la C
o Taille < à 1000nm de diamètre
Caractéristiques des exosomes ?
- Petite taille, moins de 200nm
- A partir des endosomes dans lesquels apparaissent les petites vésicules intraliminales (ILV) par invagination
Que sont les corps multivésiculaires ?
Endosomes + ILV = corps
multivésiculaires
Caractéristiques des corps apoptotiques ?
o Produits lors de l’apoptose
o Svt + grands (>1 000 nm)
o Produites avec destruction de la C
o Contiennent du matériel nucléaire, des histones et des fragments d’organites cellulaires
Caractéristiques des exomères ?
o Très petites : 30-50 nm
o pas de bicouche lipidique => pas des VE
o Processus de biogenèse peu connu
o Possiblement issus des organites intracellulaires
o + rigides
o Capables de fusionner facilement avec les cellules de
la moelle osseuse ou du foie
Quelles sont les différentes technique d’isolement des VE ?
o Par précipitation,
o Par colonne d’exclusion,
o Sur gradient de densité
o Par chromatographie d’exclusion
o Par immuno-capture
Quelle est la technique d’isolement les plus utilises avec les VE ?
Ultracentrifugation
Comment se fait la caractérisation des VE ?
1- Vérification de leurs morphologies
2- Démontrer la présence de marqueurs spécifiques : Prot transmembranaire, prot associées aux lipides membranaire, Prot cytosolique présentes dans VE
3- Vérifier le degré de pureté : vérifier niveau de présence de marqueurs de
lipoprotéines, vérifier le niveau de présence de marqueurs nucléiques
Principe de l’analyse de suivi des nanoparticules ?
Laser éclaire la particule => lumière diffractée capturée à l’aide d’une caméra CCD => particule est suivie durant quelque seconde => Distance parcourue est liée à un diamètre hydrodynamique
Biogénèse des exosomes ?
Débute par une endocytose => vésicules d’endocytose internalisées fusionnent avec endosomes précoces => maturation des endosomes précoces => tardifs => permet accumulation des ILV dans la lumière
de l’endosome => MVB : 2 destinées possibles : 1) fusion avec les lysosomes
2) fusion avec la membrane plasmique
Que sont les ESCRT ?
Endosomal Sorting Complex Required for
Transport : Protéines assemblées en quatre complexes : ESCRT 0, I, II, III
Quelles sont les protéines associées au ESCRT ?
- VSP4
- Alix
- VAT1
- TSG101
Propriétés des tétraspanines ?
Capacité d’interagir avec nbreuses
prot au sein de microdomaines
Rôles des lipides pour les VE ?
o impliquerait la synthèse des céramides
o Sphingomyélinase neutre => hydrolyse sphingomyéline en céramide
o Les céramide génère des sous-domaines membranaires
Mécanisme de biogénèse des microvésicules ?
o Mobilisation d’enzymes contrôlant l’asymétrie des
phospholipides membranaires
o Perte de l’asymétrie membranaire = excès de charge
négative à la surface de la membrane plasmique => courbure de la membrane + réorganisation du
cytosquelette => formation + libération des MV
Libération des MV ?
o par fission
o Dépend de la présence de protéine ESCRT
o Dépend de l’interaction de l’actine et de la myosine
Composition des VE ?
- Grand nb de molécules à leur surface, dans leur
membrane ou à l’intérieur - Très haut niveau de complexité
- Constituants dépendant :
o du type cellulaire
o du stimulus
o de l’état physiologique ou physiopathologique de la C productrice - VE peuvent aussi contenir des organites entiers => uniquement MV = mitochondries
o Existe des composants «marqueurs»
o Utilisés pour leur caractérisation
