Biocell Krejbich - Chap 3 Flashcards
Observation MP
- Grande diversité de paysages
- ø visible en MO mais en MET oui
- Observation MET : structure tri-lamellaire (7,5 nm)
→ 2 feuillets sombres (2 nm chacun)
→ 1 feuillet clair (3,5 nm)
Modèle de choix pour l’étude de la MP
GR ou hématies car ce sont des ç eucaryotes sans organites
Après hémolyse et ultracentrifugation des GR
- 40% lipides
- 50% protéines
- 10% glucides
→ % variables selon type çlaire
Structure des lipides de la bicouche
- Extrémité polaire = tête hydrophile
- Extrémité non polaire = queue hydrophobe
→ Structure amphiphile ou amphipathique
Exemples de lipides de la bicouche
- Glycérophospholipides
- Sphingolipides
- Stérols
Diacylglycérol composé de…
- Glycérol
- 2 AG
Phosphatidate composé de…
- Phosphate / acide phosphorique
- Glycérol
- 2 AG
Glycérophospholipide composé de…
- Amino-alcool (choline, sérine, éthanolamine, inositol)
- Phosphate / acide phosphorique
- Glycérol
- 2 AG
Exemples de glycérophospholipides
- Phosphatidyl-choline : neutre
- Phosphatidyl-sérine : négatif
- Phosphatidyl-éthanolamine : neutre
- Phosphatidyl-inositol : négatif
Sphingolipide
- Le + représenté au niveau de la membrane
- Le seul phospholipide qui ne dérive pas du glycérol
Sphingolipide composé de :
- Sphingosine + AG (Céramide)
- Phosphate + Choline (ou Éthanolamine)
Maladie de Tay-Sachs
Accumulation de gangliosides
Maladie de Gaucher
Défaut d’élimination d’un cérébroside
Exemples de sphingolipide
- Céramides
- Sulfatides
- Cérébrosides
- Gangliosides
- Sphingomyéline +++
Stérols
- Dérivent d’un noyau stéroïde
- Cholestérol = principal chez animaux
→ ø chez plupart membranes végétales
→ ø chez procaryotes sauf mycoplasmes
→ Précurseurs hormones stéroïdes et vitamine D
Stérols est composé de…
- Tête polaire (OH)
- Corps cyclique apolaire
- Chaine carbonée apolaire
Ag oh (groupe Bombay) composé de :
Dans l’ordre :
- Galactose
- N-acétylglucosamine
- Galactose
- Glucose
- Lipide
Passage de l’Ag oh à l’Ag H (groupe O)
Grâce au fucosyl-transférase
Ag H (groupe O) composé de…
Dans l’ordre :
- Fucose
- Galactose
- N-acétylglucosamine
- Galactose
- Glucose
- Lipide
Passage de l’Ag H (groupe O) à l’Ag A (groupe A)
Grâce au N-acétylgalactosamine-transférase
Ag A (groupe A) composé de…
Dans l’ordre :
- N-acétyl-galactosamine
- Galactose - Fucose
- N-acétylglucosamine
- Galactose
- Glucose
- Lipide
Passage de l’Ag H (groupe O) à l’Ag B (groupe B)
Grâce à la galactose-transférase
Ag B (groupe B) composé de…
Dans l’ordre :
- Galactose
- Galactose - Fucose
- N-acétylglucosamine
- Galactose
- Glucose
- Lipide
Si groupe sanguin A : Ag présents sur hématie est…
Ag A
Si groupe sanguin A : AC circulants est…
Anti-B
Si groupe sanguin B : Ag présents sur hématie est…
Ag B
Si groupe sanguin B : AC circulants est…
Anti-A
Si groupe sanguin AB : Ag présents sur hématie est…
Ag A et Ag B
Si groupe sanguin AB : AC circulants est…
ø
Si groupe sanguin O : Ag présents sur l’hématie est…
Ag H
Si groupe sanguin O : AC circulants est…
Anti-A et Anti-B
Test de compatibilité : Beth-Vincent
= sérums test
- Sang individu + sérums (AC)
→ Mise en évidence des Ag présents sur GR
Test de compatibilité : Simonin
= hématies test
- Sérum individuel (AC) + hématies (Ag)
→ Mise en évidence des AC présents
Propriété des lipides : auto-assemblage
- AG → forme conique → monocouche : film monomoléculaire → micelle
- PLs → forme cylindrique → bicouche : film bimoléculaire → liposome (auto-fermeture)
3 mouvements des lipides
1) Diffusion latérale
2) Rotation, flexion
3) Basculement / Flip-Flop
Diffusion latérale
- Changement de place dans monocouche
- Grâce agitation naturelle thermique
Rotation, flexion
Par rapport à leur axe longitudinal
Basculement / Flip-Flop
Changement de place entre les 2 monocouches
Translocases spécifiques
→ de sens et de lipides ; ATP dép
- Flippase : in → PS, PE
- Floppase : out → PC, SM
→ Maintenir asymétrie de la MP
Translocases non spécifiques
→ ni de sens, ni de lipides ; non ATP dép
- Scramblases : équilibrer [C] des lipides entre 2 monocouches
Protéines membranaires : 2 types
- Intrinsèques
- Extrinsèques
Protéines membranaires intrinsèques
- Transmembranaire
- Ancrées = monotopiques
Protéines membranaires intrinsèques transmembranaires
- Bitopiques hélice ⍺
- Polytopiques : hélice ⍺ ou feuillet 𝛃
Protéines membranaires intrinsèques ancrées
- Ancre GPI (toujours extraçlaire)
- Ancre lipidique (Majorité intraçlaire)
Protéines membranaires extrinsèques
- Extraçlaire
- Intraçlaire
Exemples d’ancres lipidiques
- Ancre myristique
- Ancre palmitique
- Ancre prényl (farnésyl ou géranylgéranyl)
Ancre myristique
Acide myristique ajouté au N-term d’un glycocolle par liaison amide
Ancre palmitique
Acide palmitique ajouté à la prot sur -SH d’une cystéine par liaison thioester
Ancre prényl
Groupement prényl ajouté près extrémité carboxy-terminale par liaison thioester
Glucides et MP
- Toujours sur le côté extraçlaire de la MP
- Réprésentent 10% MP : dont 90% glycoprot et 10% glycolipides (liaison covalente)
- Feutrage fibrillaire épais, b
visible en ME - Glycocalyx ou cellcoat
Asymétrie de la MP est due…
- Répartition des lipides
- Orientation des protéines
- Emplacement des glucides
Asymétrie de la MP : répartition des lipides
- Feuillet interne : PS + PE + PI
- Feuillet externe : SM + PC + glycolipides
Asymétrie de la MP : orientation des protéines
- Prots ont toujours la même orientation dans la membrane (→ mode d’insertion co-traductionnel)
- Présence glycoprotéines uniquement côté extraçlaire
- Environnement :
→ réducteur côté cytocol (présence SH)
→ oxydant côté extraçlaire (présence SS)
Asymétrie de la MP : emplacement des glucides
- Présence des glucides uniquement côté extraçlaire
- Glycoprot, glycolipides, glycanes, protéoglycanes = cell coat = glycocalyx
Mosaïque fluide par…
Singer et Nicholson
Fluidité de la MP dépend de…
- La T°
- La composition en lipides
- Cholestérol
Fluidité de la MP : T°
- Implique transition de phase due à la mobilité accrue autour des liaisons C-C des chaines aliphatiques des AG
- ↗︎° T° = ↗︎° fluidité = état désordonné
- ↘︎° T° = ↗︎° viscosité = état visqueux
NB : ↗︎° T° = ↗︎° mvts lipidiques (rotation et diffusion latérale)
Fluidité de la MP : Composition en lipides
- Nature des AG : + AG insaturés → + MP fluide
- Longueur chaines hydrocarbonées : + chaine C courtes → + MP fluide
Fluidité de la MP : Cholestérol
⚠️ Effet dépend de la composition en AG de la MP
Cholestérol : Si MP riche en AG saturés
Si MP riche en AG saturés = visqueuse
Alors cholestérol s’intercale en PL : ↘︎° interactions hydrophobes et ↗︎° fluidité
Cholestérol : Si MP riche en AG insaturés
Si MP riche en AG insaturés = fluide
Alors cholestérol s’intercale entre PL : ↗︎ interactions hydrophobes et ↘︎° fluidité
Cryofracture et cryodécapage : généralités
Permet d’observer des plans de fractures internes et non des surfaces
Cryofracture et cryodécapage : déroulement
1) Congélation du tissu
2) Fracture en 2 fragments
Facultatif) Cryodécapage
3) Réplique
4) Dissolution du matériel biologique
5) Observation de la réplique au ME
Cryofracture et cryodécapage : étape 1
Congélation du tissu : Fréon (-100°) ou Azote (-192°)
Cryofracture et cryodécapage : étape 2
Fracture en 2 fragments : Plan de fracture traversant la bicouche
Cryofracture et cryodécapage : facultatif
Cryodécapage : Par sublimation de la glace en surface (creusement des reliefs)
Cryofracture et cryodécapage : étape 3
Réplique :
- A) Contraste par ombrage métallique : vaporisation oblique d’un métale
- B) Réalisation de l’empreinte : vaporisation perpendiculaire d’un film de carbone
Cryofracture et cryodécapage : observations de liposomes et membrane biologique
- Liposomes : plans de fracture lisse
- Membrane biologique : plans de fracture granuleux
Technique hétérocaryons (ç hybrides)
- A fourni preuve directe que les prots de la MP sont mobiles dans le plan de la membrane
1) On fusionne ç souris + ç humaine = hétérocaryon
2) On incube AC (fluo vert) contre prots de souris + AC (fluo rouge) contre prots humaines
3) On se rend compte que les prots se sont déplacées
Technique FRAP
= Récupération de fluorescence après photoblanchiment
1) Marquage prots avec AC fluo ou GFP
2) On blanchie une partie de ces molécules fluo
3) On remarque que les molécules blanchies sortent par diffusion de zone irradiée et les molécules non blanchies y entrent par diffusion
Technique FLIP
= Perte de fluorescence après photoblanchiment
1) Marquage prots avec AC fluo ou GFP
2) Une petite surface est irradiée de façon continue
3) On mesure fluo dans une autre zone
4) On remarque fluo diminue dans cette autre zone : prots fluo en sortent par diffusion et molécules blanchies y entrent
5) À la fin toutes les molécules sont blanchies
Technique IFRAP
= Inverse de FRAP
Au lieu de blanchir une zone, on blanchit toute la surface en laissant une zone fluo
