Aula 4 - Postulados de Koch. Tipos de meios de cultura para bactérias. Flashcards
Quais as 3 limitações com os postulados de Koch
-Problemas em reproduzir noutras espécies animais aquilo que acontece com os humanos: ao inocular um microrganismo num animal saudável, este pode não desenvolver os mesmos sintomas que os organismos que foram estudados.
-Um microrganismo pode ser patogénico num determinado contexto, mas não noutro.
-Podemos encontrar microrganismos numa população saudável, mas também numa subpopulação mais suscetível e que, por isso, desenvolve doença quando infetada por esse mesmo microrganismo —> Contrapõe postulado 1
Diz os 4 passos gerais para pesquisa bacteriológica.
Crescer o microrganismo a partir de uma amostra
(meios de cultura apropriados)
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V
Isolamento em cultura pura
(meios selectivos, meios sólidos)
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V
Expansão
(Meio líquido)
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V
Caracterização
(Colorações, estudos bioquímicos, estudos genéticos)
Temos sempre que usar meios seletivos para isolar bactérias?
Não é obrigatório usar meios seletivos para isolar bactérias em cultura pura. O importante, que permite fazer esse isolamento, é utilizar meios de cultura sólidos (as bactérias não se movimentam nestes meios, o que permite o seu fácil manuseamento). Atualmente, utiliza-se agar que, contrariamente à gelatina que era utilizada anteriormente, mantém-se mantém-se sólido à temperatura de 37°C, que é a temperatura ótima para o crescimento de um grande número de espécies de bactérias. Além disso, uma outra vantagem do agar é o facto de este não ser utilizado pelas bactérias, contrariamente à gelatina. Os meios sólidos têm a desvantagem de gerarem uma pequena quantidade de bactérias.
Colónias…
são constituídas por bactérias todas iguais (mesma espécie)
Quais os tipos de meios de cultura
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Estado físico:
- Sólido
- Líquido
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Composição:
- Definido
- Complexo
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Objetivo:
- Simples
- Seletivo
- Diferencial
- Enriquecido (adição de um produto biológico rico em nutrientes)
Caracteriza um meio de cultura líquido.
- Meio de cultura líquido: permitem obter grandes quantidades de bacterias e dos seus produtos metabólicos. Rico em nutrientes.
Caracteriza um meio de cultura sólido.
- Meio de cultura sólido: permitem que as bactérias sejam e permaneçam separadas, dando origem a colónias todas iguais. É ainda mais fácil de transportar e armazenar as caixas de Petri. O gel normalmente é agar.
Caracteriza um meio de cultura complexo.
- Meio de cultura complexo: ingredientes ricos, sem composição fixa ou definida. Meio de cultura igualmente bom para E. coli ou Leuconostoc mesenteroides. Permite o crescimento da maior parte das bacterias, mas não são definidos, não sendo específico o que a bactéria necessita para crescer. Possui produtos como extratos que não sabemos o que possuem a nível molecular.
Glucose, extrato de levedura, peptona, KH2PO4, H2O. Utilizados mais frequentemente porque servem para a maior parte das bactérias e para o tipo de trabalho que fazemos.
Caracteriza um meio de cultura molecularmente definidos.
- Meio de cultura molecularmente definido: sabe se as fórmulas moleculares e quantidades que possui. A E. coli consegue crescer num meio mínimo (um meio que tem os nutrientes mínimos indispensáveis para uma bactéria quimio-heterotrofica prototrófica proliferar). No entanto, a Leuconostoc mesenteroides necessita de um meio muito rico para crescer pelo que normalmente se usa um meio complexo. Só usamos o meio molecularmente definido quando é mesmo necessário para a nossa experiência.
Difere quimicamente o meio molecularmente definido para a E.coli e para a Leuconostoc mesenteroides.
Meio para E. coli:
Ingredientes: KH₂PO₄, K₂HPO₄, (NH₄)₂SO₄, MgSO₄, CaCl₂.
Glucose como fonte de carbono e energia.
Oligo-elementos (Fe, Co, Mn, Zn, Cu, Ni, Mo) naturalmente presentes.
E. coli cresce em meio mínimo, fornecendo nutrientes essenciais.
Meio para Leuconostoc mesenteroides:
Ingredientes: KH₂PO₄, K₂HPO₄, NH₄Cl, MgSO₄.
Fonte de carbono: Glucose, acetato de sódio.
Aminoácidos, nucleotídeos e vitaminas variados.
Oligo-elementos presentes naturalmente.
Caracteriza o meio seletivo e diferencial: Manitol-Salt-Agar
Manitol-Sal-Agar: é um meio seletivo devido ao sal (7,5% muito superior a concentração dentro das células de 0,9%), o qual é toxico para algumas bacterias que não conseguem controlar a saída de água. O meio é ainda diferencial, uma vez que fica amarelo quando ocorre acidificação pela fermentação de manitol (o vermelho de fenol permite a
mudança de cor). Este método seletivo permite separar Statoelocupos e o método diferencial permite separar dentro deste grupo de bactérias.
Caracteriza o meio seletivo e diferencial: EMB (Eosin Methylene Blue)
- Eosin methylene blue (EMB) agar: é um método diferencial devido a presença de lactose que só pode ser digerida por algumas bacterias, levando a acidificação do meio e mudança de cor. É ainda seletivo uma vez que o metileno apenas deixa alguns tipos de bacterias viver. A lactose aqui serve o mesmo papel que o manitol no MSA. Inibe o crescimento de bactérias gram positiva; amplamente utilizado para a deteção de E.coli
Caracteriza o meio seletivo e diferencial: Agar MacConkey.
- Agar MacConkey (MAC): usa lactose como o anterior, mas permite diferentes intensidades dependendo da quantidade de lactose que conseguem metabolizar, permitindo distinguir entre tipos de bacterias do tipo Enterobacteriaceae. É seletivo para este tipo de bacterias devido aos sais biliares que permitem selecionar bacterias
do intestino e dos cristais de violeta que permitem selecionar as Enterio dentro das bacterias do intestino. Esta família de bacterias estão presentes nos intestinos e grande parte são comensais, sem causar doenças.
Violeta de cristal e sais biliares –> inibem o crescimento de bactérias gram positivo.
Caracteriza o meio enriqecido e diferencial: Gelose sangue (Blood agar).
Gelose agar: adiciona-se sangue ao agar nutriente, o que permite enriquecer o agar e torna o meio opaco. Este gel é diferencial porque apesar de deixar crescer todas as bacterias, há algumas que conseguem degradar os glóbulos vermelhos deixando o sangue transparente a sua volta (têm hemolisinas). Estas células são hemolíticas. não é seletivo.
Caracteriza o quimicamente definido e diferencial: Agar citrato simmons
- Simmons-citrato-agar: permite diferenciar as que conseguem usar citrato como fonte de carbono, aumentando o pH e o meio passa de verde para azul. É também seletivo, pois as bactérias que não conseguem usar o citrato (única fonte de carbono) não crescem
