WC formulering van eiwitten + WC PK/PD stoll Flashcards
Welke eisen stel je aan het eindproduct?
2 eenheden van iso-elektrisch punt afzitten en het liefst zuurder. Als Iso = 5 dan 2 eenheden eronder = 3. Dit is heel zuur, kan overwegen om 5+2 = 7 te doen (erboven)
- Werkzaam
- Veilig
- Steriliteit (endotoxinen, pyrogenen)
- Osmolariteit
- Geen luchtbellen
- pH (stabiliteit)
- Vrij van onzuiverheden
Soort hulpstoffen
Oplosbaarheidsverhogers
- dmv ph instellen
- toevoegen aminozuren lysine/arginine
anti-adsorptie groepen
buffercomponenten
conserveermiddelen en anti-oxidanten
- Methionine, cysteïne, tryptofaan, tyrosine en histidine zijn gevoelig voor oxidatie. Dus eiwitten rijk van deze aminozuren ook. Daarom zuurstof vervangen door
inerte gassen. Ook kunnen antioxidanten (ascorbinezuur, acetylcysteïne) toegevoegd worden.
- Meerdere toedieningen uit één product, dan moet het beschermt worden tegen m.o. d.m.v. conserveermiddelen (fenol, p-hydroxybenzoic acids, benzylalcohol).
Osmotische stoffen
Voor vriesdrogen
- lyoprotectant, cryoprotectant
Schrijf een CBV voor een eiwitproduct
- aseptisch bereiden (lafkast)
- klein overschot maken, bijv 5 ampullen nodig, maak 6
- gehalte bepalen stockoplossing met UV, zodat je weet hoeveel je moet gebruiken
- toevoegen hulpstoffen
- filtreren
- borrelpunttest
- eindcontroles
Hoe kun je kwaliteit van product garanderen?
- quality by design (vooraf valideren bereidingsvoorschrift)
- microbiologisch, steriliteit valideren (bouillontest)
- gehalte analyse (via UV-vis)
- zuiverheid
- massaspectrometrie (om eiwit te karakteriseren)
Wat is hemofilie?
Er zijn 2 soorten hemofilie Hemofilie A: tekort aan Factor 8 Hemofilie B: tekort aan Factor 9 --> Door afwezigheid of afwijking in gen Hemofilie A komt 5 maal meer voor dan hemofilie B. De ernst van hemofilie kan variëren van ernstig, matige ernstig en mild. Dit wordt bepaald door de hoeveelheid factor VIII of IX die in het bloed aanwezig is.
Hemofilie is een geslachtsgebonden aandoening die van ouder op kind wordt doorgegeven. Omdat
de factor VIII en IX genen op het X-chromosoom zijn gelegen, treft de ziekte vrijwel uitsluitend
mannen. Vrouwen zijn draagster van de ziekte,
Factor 8
Factor VIII draagt samen met fosfolipiden,
calcium en geactiveerd factor IX zorg voor de omzetting van factor X in factor Xa. Om biologisch actief te kunnen zijn moet factor VIII eerst worden geactiveerd door trombine of factor Xa. De geactiveerde factor VIII werkt zelf niet als
proteolytisch enzym, maar versterkt de werking van factor IXa. Voor de regulatie van de activiteit van factor VIII is de inactivering van factor VIIIa door geactiveerd proteïne C van belang.
Factor 9
Factor IX is een vitamine-K-afhankelijk eiwit dat wordt gemaakt in de hepatocyt. Factor IX wordt
geactiveerd door factor XIa in aanwezigheid van calcium of door factor VIIa en tissue factor.
Welke soorten gradaties zijn er voor hemofilie?
- Ernstige hemofilie waarbij al bloedingen spontaan kunnen ontstaan. Het gehalte aan
stollingsfactoren bedraagt minder dan 1% van de normale waarde. - Matige hemofilie waarbij bloedingen meestal ontstaan na een duidelijke aanleiding. Het gehalte aan stollingsfactoren bedraagt 1 à 5% van de normale waarde.
- Milde hemofilie waarbij bloedingen meestal alleen ontstaan na een ernstig ongeluk of een
operatie. Het gehalte aan stollingsfactoren bedraagt 5 à 40% van de normale waarde.
Welke producten kunnen worden ingezet bij de behandeling van hemofilie?
De lichte vorm van hemofilie A kan worden behandeld met desmopressine. Ernstiger vormen worden
behandeld met factor VIII, octocog alfa of met moroctocog alfa.
Hemofilie B wordt behandeld met plasma dat factor IX bevat, met protrombine complex dat behalve
factor IX nog andere stollingsfactoren bevat, of met nonacog alfa.
Desmopressine
De hemostatische werking bij hemofilie A en de ziekte van Von Willebrand berust op tijdelijke verhoging van de concentraties van factor VIII en Von Willebrandfactor door de afgifte hiervan uit endotheelcellen te stimuleren.
Tranexaminezuur
mond en slijmvliesbloedingen, waarbij fibrinolytische activiteit is toegenomen.
- Remt afbraak fibrine. Analoog van lysine.
DUS bloedstolling houdt aan
Verschillende producten
Kogenate: recombinant product (FVIII)
HaemateP: plasmaproduct (FVIII+VWF), dus kan ook bij Ziekte van von Willebrand.
Octocog alfa: recombinant product (FVIII)
halfwaardetijden factoren
- De halfwaardetijd van factor VIII bedraagt 8 tot 12/15 uur (met VWF)
- van factor IX 18 tot 24/34 uur.
Patiënten moeten dus meerdere keren per week naar het ziekenhuis om injecties te krijgen.
Zonder VWF: 1-2 uur (Factor 8)
Halfwaardetijd VWF: 12 uur (dus halfwaardetijd van VIII komt dus door VWF halfwaardetijd).
Wat voor invloed heeft VWF op de halfwaardetijd van factor 8
Dat verlengt de HALFWAARDETIJD. Hier zijn verschillende mogelijkheden voor:
- VWF stabiliseert de heterodimere structuur van FVIII; - - VWF beschermt FVIII tegen proteolytische degradatie door geactiveerd protein C en geactiveerd FXa;
- VWF interfereert met binding van FVIII aan negatief geladen fosfolipiden oppervlakken zoals op geactiveerde plaatjes;
- VWF binding van FVIII aan geactiveerd FXa waardoor het geen toegang heeft tot het FX activerende complex;
- VWF voorkomt cellulaire opname van FVIII.
Het verlengd dus de halfwaardetijd door de degradatie en klaring te voorkomen van factor VIII.
ALS FACTOR 8 NIET GEBONDEN IS T1/2 1 OF 2 UUR EN WEL GEBONDEN GAAT NAAR 8-12? UUR.
Wat is er bekend over klaringsmechanisme bij factor 8?
Klaringsreceptoren:
- LDL-receptor-related protein-1: bindt aan VIII en medieert het transport naar intracellulaire
degradatie pathways. Vervolgens proteolyse (in de lever).
- LDL-receptor family members
- Proteoglycans en carbohydrate receptors: VIII kan hieraan binden (zit op het celmembraan) en zorgt voor internalisatie (minder snel dan LRP1). Vorming antilichamen
–> Receptor-gemedieerd in de lever, waarbij alleen het vrije FVIII wordt opgenomen.
