Technologies de l'ADN Flashcards
Qu’est ce qu’une nucléase
enzyme qui clive les liaisons phosphodiester de brins acides nucléiques entre deux nucléotides
Types de nucléase
exonucléase
endonucléase
Fonction d’une exonucléase
enzyme qui coupe les acides nucléiques à partid d’une extrémité des deux sens
Fonction d’une endonucléase
enzyme qui coupe au milieu de la chaine d’acide nucléique, prosuisant des fragments
Qu’est ce qu’une endonucléase de restriction
coupent l’ADN bicaténaire à des endroits caractérisés par des séquences de nucléotides spécifiques
Comment appelle on les séquences de nucléotides spécifiques clivés par des endonucléases de restriction
sites de restriction
Pourquoi les bactéries ont des enzymes de restriction
défense contre les virus des bactéries en coupant l’ADN étranger en morceaux
La vaste majorité des enzymes de restrictions/endonucléases de restrictions reconnaissent quel type de séquences
palindromique
Qu’est ce qu’une séquence palindromique
qui se lit de la même facon dans les deux directions
2 types de bouts résultant du clivage par des enzymes de restriction
bouts francs
bouts collants
Comment séparer et identifier les fragments d’ADN coupés après digestion avec des enzymes de restriction
électrophorèse sur gel d’agarose
Pourquoi est ce que l’électrophorèse sur gel d’agarose fonctionne
car l’ADN est négative
Principe de l’électrophorèse sur gel d’agarose
Molécules d’ADN de différentes taille mise sur une plaque contenant du gel d’agarose
On met un courant électrique avec un pole positif et négatif, et on place les ADN sur le coté négatif
Les molécules d’ADN les plus loudes vont moins migré vers le + que les plus légère (ADN est négative)
On peut ensuite déduire la taille par le poids à l’aide d’un témoin
Lors de l’électrophorèse sur gel d’agarose, qu’est ce qui nous permet de voir ou les moécules d’ADN sont sur la plaque
à l’aide ddu bromure d’ethidium et d’une lumière UV (molécule fluorescente s’intercale à l’intérieur de la double hélice)
Quelle enzyme permet de joindre deux morceaux d’ADN ensemble après les avoir digérer par une enzyme de restriction
ligase (processus de ligation) en prenant 2 fragments d’ADN et reformant un lien phosphodiester avec de l’ATP
Quelle ligation est plus efficace entre celles de deux bouts francs et celle de deux bouts collants
et pourquoi
deuc bouts collant
car les deux bouts collants (nucléotide sur les bouts) s’apparient et stabilisent les intéractions, alors que les bouts francs dépendent de collisions aléatoires
Principe du cloning
Perpétuation et production d’ADN recombinant en qte illimité dans un vecteur d’ADN qui peut se répliquer de façon autonome
Qu’est ce qu’un plasmide
cercle d’ADN bicaténaire qui peut se répliquer de façon autonome dans un organisme hote
Qu’est ce qu’un vecteur
plasmide manipulé en laboratoire dans lequel on peut insérer des fragments d’ADN
Comment est ce qu’on insère un gène qu’on veut répliquer dans un plasmide
Insert des enzymes de restriction (comme Eco RI) qui clivent deux sections de l’ADN puis on insert le gène qui est complémentaire à ces deux bouts, pour ensuite les combiner avec une ligase
Qu’est ce qu’une trnasformation
introduction d’un plasmide dans une souche de bactérie ou levure
Comment identifier les cellules qui ont recu le plasmide si l’efficacité n’est pas de 100% (n’acceptent pas tous le plasmide)
utilise un marqueur de sélection, soit un gène qui code pour la résistance à un antibiotique, pour sélectionner les cellules qui ont recu le plasmide
on le met dans un environnement antibiotique et on regarde quelles cellules ont survécues
Comment est ce qu’on amplifie un plasmide
en le mettant dans une bactérie, elle peut se divisé et produire plus de bactéries avec le même plasmide
Utilité de l’amplification d’un plasmide contenant un gène codant pour une protéine
grande production de protéines recombinantes
poursuivre un clonage
