Technologies de l'ADN

Question 1

Qu’est ce qu’une nucléase

Answer 1

enzyme qui clive les liaisons phosphodiester de brins acides nucléiques entre deux nucléotides

Question 2

Types de nucléase

Answer 2

exonucléase
endonucléase

Question 3

Fonction d’une exonucléase

Answer 3

enzyme qui coupe les acides nucléiques à partid d’une extrémité des deux sens

Question 4

Fonction d’une endonucléase

Answer 4

enzyme qui coupe au milieu de la chaine d’acide nucléique, prosuisant des fragments

Question 5

Qu’est ce qu’une endonucléase de restriction

Answer 5

coupent l’ADN bicaténaire à des endroits caractérisés par des séquences de nucléotides spécifiques

Question 6

Comment appelle on les séquences de nucléotides spécifiques clivés par des endonucléases de restriction

Answer 6

sites de restriction

Question 7

Pourquoi les bactéries ont des enzymes de restriction

Answer 7

défense contre les virus des bactéries en coupant l’ADN étranger en morceaux

Question 8

La vaste majorité des enzymes de restrictions/endonucléases de restrictions reconnaissent quel type de séquences

Answer 8

palindromique

Question 9

Qu’est ce qu’une séquence palindromique

Answer 9

qui se lit de la même facon dans les deux directions

Question 10

2 types de bouts résultant du clivage par des enzymes de restriction

Answer 10

bouts francs
bouts collants

Question 11

Comment séparer et identifier les fragments d’ADN coupés après digestion avec des enzymes de restriction

Answer 11

électrophorèse sur gel d’agarose

Question 12

Pourquoi est ce que l’électrophorèse sur gel d’agarose fonctionne

Answer 12

car l’ADN est négative

Question 13

Principe de l’électrophorèse sur gel d’agarose

Answer 13

Molécules d’ADN de différentes taille mise sur une plaque contenant du gel d’agarose
On met un courant électrique avec un pole positif et négatif, et on place les ADN sur le coté négatif
Les molécules d’ADN les plus loudes vont moins migré vers le + que les plus légère (ADN est négative)
On peut ensuite déduire la taille par le poids à l’aide d’un témoin

Question 14

Lors de l’électrophorèse sur gel d’agarose, qu’est ce qui nous permet de voir ou les moécules d’ADN sont sur la plaque

Answer 14

à l’aide ddu bromure d’ethidium et d’une lumière UV (molécule fluorescente s’intercale à l’intérieur de la double hélice)

Question 15

Quelle enzyme permet de joindre deux morceaux d’ADN ensemble après les avoir digérer par une enzyme de restriction

Answer 15

ligase (processus de ligation) en prenant 2 fragments d’ADN et reformant un lien phosphodiester avec de l’ATP

Question 16

Quelle ligation est plus efficace entre celles de deux bouts francs et celle de deux bouts collants
et pourquoi

Answer 16

deuc bouts collant
car les deux bouts collants (nucléotide sur les bouts) s’apparient et stabilisent les intéractions, alors que les bouts francs dépendent de collisions aléatoires

Question 17

Principe du cloning

Answer 17

Perpétuation et production d’ADN recombinant en qte illimité dans un vecteur d’ADN qui peut se répliquer de façon autonome

Question 18

Qu’est ce qu’un plasmide

Answer 18

cercle d’ADN bicaténaire qui peut se répliquer de façon autonome dans un organisme hote

Question 19

Qu’est ce qu’un vecteur

Answer 19

plasmide manipulé en laboratoire dans lequel on peut insérer des fragments d’ADN

Question 20

Comment est ce qu’on insère un gène qu’on veut répliquer dans un plasmide

Answer 20

Insert des enzymes de restriction (comme Eco RI) qui clivent deux sections de l’ADN puis on insert le gène qui est complémentaire à ces deux bouts, pour ensuite les combiner avec une ligase

Question 21

Qu’est ce qu’une trnasformation

Answer 21

introduction d’un plasmide dans une souche de bactérie ou levure

Question 22

Comment identifier les cellules qui ont recu le plasmide si l’efficacité n’est pas de 100% (n’acceptent pas tous le plasmide)

Answer 22

utilise un marqueur de sélection, soit un gène qui code pour la résistance à un antibiotique, pour sélectionner les cellules qui ont recu le plasmide
on le met dans un environnement antibiotique et on regarde quelles cellules ont survécues

Question 23

Comment est ce qu’on amplifie un plasmide

Answer 23

en le mettant dans une bactérie, elle peut se divisé et produire plus de bactéries avec le même plasmide

Question 24

Utilité de l’amplification d’un plasmide contenant un gène codant pour une protéine

Answer 24

grande production de protéines recombinantes
poursuivre un clonage

Question 25

Qu’est ce que le GFP

Answer 25

green fluorescent protein qui permet d’étudier différentes structures par sa lumière fluorescente

Question 26

Comment peut on obtenir un ADN simple brin pour la réplication de l’ADN in vitro (donc à l’extérieur de l’organisme)

Answer 26

dénaturation thermique

Question 27

Quel type d’appariement de bases azotés complémentaire à besoin d’une moins forte température pour se dénaturer

Answer 27

A-T, car il y a seulement 2 ponts H comparé au G-C

Question 28

Qu’est ce que l’hybridation

Answer 28

ADN dénaturé simple brin peut se renaturer en ADN double brin lorsqu’il revient aux conditions initiales (baissant la température)

Question 29

Quelle méthode permet de déterminer la séquence d’ADN d’un gène

Answer 29

méthode de sanger

Question 30

Différence entre un dNTP et un ddNTP

Answer 30

dNTP: OH 3’ qui permet extension avec une autre molécule dNTP
ddNTP: manque un OH 3’, donc find de l’élongation de la chaine d’ADN

Question 31

Expliquez les étapes de la méthode de Sanger (méthode de ddNTP)

Answer 31

1. séparation des brins d’ADN et ajout d’une amorce pour la polymérase
2. 4 tubes contenant chacun un ddNTP, une sorte des 4 acide nucléique et ADN polymérase
3. ADN polymérase synthétise comme d’habitude jusqu’à prendre un ddNTP, ce qui bloque la transcription à cause du OH 3’ manquant
4. utiliser une analyse par gel et déduire la séquence du gène

Question 32

Qu’est ce que le PCR

Answer 32

polymerase chain reaction

Question 33

Principe du PCR (3 étapes)

Answer 33

séparation des brins par hausse de temp
hybridation des amorces par baisse de temp
synthèse par ADN polymérase

Question 34

ADN polymérase utilisée pour le PCR à basse température

Answer 34

ADN polymérase E coli

Question 35

ADN polymérase utilisée pour le PCR à haute température

Answer 35

Taql ADN polymérase

Question 36

Fonction de la réaction PCR

Answer 36

produire beaucoup d’ADN a partir de quelques molécules

Question 37

Comment est ce qu’on utilise le PCR en médecine légale

Answer 37

détermination du père
identification de cadavre ou suspects

Question 38

Qu’est ce qu’un SNP (snip)

Answer 38

Single nucleotide polymorphisms
Site ou les individus diffèrent selon une seule base d’ADN et qui est a risque de développement de maladies

Question 39

Différence entre un SNP et une mutation

Answer 39

SNP sont une variation de base d’ADN simple plus fréquente que des mutations

Question 40

Qu’est ce que le système CRISPR-Cas9

Answer 40

édition de génome de manière spécifique