Techniques Biochimiques Examen 1 Flashcards
C’est quoi les lectines?
Une classe de protéines qui forment des complexes réversibles avec des mono/oligosaccharides
force de liaison lectine-saccharide __ force de liaison anticorps-antigène
a. >
b. <
c. =
force de liaison lectine-saccharide < force de liaison anticorps-antigène
Beaucoup de lectines végétales ont la capacité d’agglutiner _________
Les érythrocytes (Ou d’autres cellules qui ont à leur surface, de façon accessible, une telle glycoprotéine, glycolipide ou oligosaccharide)
- Un érythrocyte peut avoir jusqu’à 400 000 sites de liaison pour les lectines
Concanavaline A peut se lier au _____ / _____
Mannose / glucose
combien de kDa = ConA
106kDa :)
D’ou provient le ConA
fève haricot sabre/Jack beans
(Canavalia ensiformis)
Combien de sous-unités est-ce que le ConA comporte?
4 sous-unités IDENTIQUES
- 2 sites de liaison de métaux sur le ConA.
-quelles sont ces métaux
-de quelle ordre se lient-ils
- Site1: cation Mn (ou Ni, Co, Zn, Cd, Ca)
- Site2: cation Ca (ou Cd ou Mn)
*une fois Mn lié le Ca pourra se lier
C’est quoi le rôle des sites de liaisons des cations métalliques sur le ConA?
Ils induisent un changement allostérique indispensable pour pouvoir lier les sucres
5 applications/importances biologiques du ConA
- Lie les unités mannose/glucose sur les glycoprotéines (récepteurs ou glycolipides)
- Initier la division cellulaire (lymphocytes T)
- Caractérisation de cellules normales et malignes (ne s’agglutinent pas en présence de la Con A)
- chromatographie d’affinité des glycoprotéines (résine)
- Agent anti-néoplasique (Tumeur) et anti angiogénique (vaisseaux sang.)
à quelle pH est-ce que le ConA sera sous forme tétramérique?
pH : 7.0
à quelle pH est-ce que le ConA sera sous forme dimérique?
pH : 4.5 - 5.5
Quelles sont les risques de la manipulation du ConA?
- Potentiellement allergénique suite à un contact avec la peau ou suite à inhalation
- Irritation sévère aux yeux
Pourquoi est-ce que le ConA reste poingé dans les billes de sephadex G-75
Le séphadex est formé de dextran (bunch o’ glucose)
Les 4 paramètres importants pour une bonne extraction sont :
- La méthode de lyse cellulaire
- Le contrôle du pH
- La température
- Contrôle de la dégradation protéolytique
Parce qu’on ne veut pas dénaturer la protéine.
Quelle est la première étape de la purification d’une protéine?
L’extraction
4 Méthodes d’extraction de protéines douces
- Choc osmotique
- Détergents
- Digestion enzymatique
- Homogénéisateur (de type Dounce)
2 Méthodes d’extraction de protéines modérées
Homogénisation
Moudre avec sable/billes de verre
3 Méthodes d’extraction vigoureuses
- Décompression explosive avec azote
- Moudre avec des billes
- Ultrasonication
Équation de rpm :
Q(rpm) = 299*(RCF/r)^½
Équation de RCF :
RCF = 11,18*r * (Q/1000)^2
Lors d’une centrifugation, c’est quoi une barrière de densité?
C’est la ligne qui sépare une Solvant plus dense à une solvant moins dense.
C’est quoi une centrifugation discontinue vs continue?
Discontinu - on a une ou plusieurs barrières de densités (Densité de l’extrait brut n’est pas = Densité de solvant)
Continu - Aucune barrière de densité (Densité de l’extrait brut = Densité de solvant)
C’est quoi la centrifugation différentielle?
Quand tu centrifuge le lysat d’une cellule (extrait brut) et tu récupère soit le surnageant ou le culot dépendamment où se trouve votre molécule d’intérêt (analyte)