Substratlära och odlingsteknik Flashcards
Vad har bakterier för kemisk sammansättning?
70% vatten Av torrvikten: 50% protein 25% RNA 22% annat 3% DNA
Grundämnen i bakterier (procentuellt)
C 50% O 20% N 14% H 8% P 3% K 2% S 1% Och mindre mängder av Ca, CL, MG och Fe Ytterligare ca 20 grundämnen i mkt små mängder. Sk spårämnen.
Beskrivningar av vad de olika grundämnena gör i/för bakterien (kanske inte nödvändigtvis en fråga men här kommer en lista)
C:
Utgör ca hälften av cellens torrsubstans. Tillgångtill kol i relativt höga koncentrationer. Olika bakterier utnyttjar olika kolkällor (vilket kan utnyttjas när man vill identifiera olika bakterier)
N:
Kväve utgör 12-15% av torrvikten, krävs i förhållandevis höga koncentrationer. Fritt atmosfäriskt kväve N2 - enklaste kväve källan kan bara utnyttjas av ett fåtal bakterier. Flest oorganiska källor som ammoniumsalter (NH4+) och nitrater (NO3-)
K:
Många enzymer tex de i proteinsyntesen - se P
Mg:
Stabiliserar ribosomerna, cellmembran och nukleinsyror- enxymatiska processer - MgSO4
Ca:
Viktigt vid stabilisering av cellvägg och sporbildning- CaCl2
Fe:
Enzymer i ffa respirationskedjan, FeSO4
P:
Ingår bla i nukleinsyror och tas upp i oorganisk form
S:
Främst i svavelhaltiga aminosyror. Många kan utnyttja sulfater som svavelkälla.
Ämnen som inte bakterien själv kan syntetisera kallas ofta tillväxtfaktorer.
Vissa bakterier kväver inga tillväxtfaktorer andra bakterier kräver många tillväxtfaktorer. Viktigt att tänka på vid framställning av odlingssubstrat. Generellt behöver gram-positiva bakterier mer tillväxtfaktorer än gram-negativa.
Vilka är bakteriologins 5I
- Inockulering - odling av ett prov på ett medium för produktion av en kultur
- Isolering - separering av en art från en annan
- Inkubation - i lämplig miljö som tillåter växt
- Inspektion - hur ser det ut och växer
- Identifikation - identifikationsmetoder
vad står CFU för?
Colony forming units
Principen av inockulering och isolering
Om en individuell bakteriecell separeras från en annan cell och har plats att växa till på en näringsrik yta - kommer den att bilda en koloni - bestående av många celler.
Exempel på utodlingstekniker
- Utstryksodling
- Spädningsodling
- Spridningsteknik
- Gräsmatteteknik
- Kvantitativ odling
Beskriv utstrykningsodling (trestryk)
Den som används allra mest.
Streck horisontellt, sedan snett som börjar i det redan utstryka och därefter snett från det andra som är snett (förlåt för kass beskrivning)
Beskriv spädningsodling
Prover i vätska, orginalprovet odlas på platta, spädning, det odlas på platta, spädning igen och odling på platta igen
Beskriv spridningsteknik
Vätskan hälls rakt på plattan och sprids sedan ut. (verktyget ser ut som en pinne med en båge på) “som en crêpe” //Sofi
Beskriv gräsmatteodling
Spridning över hela plattan. Här är man ute efter en tät odling inte fria kolonier. Används vid resistensbestämning.
Beskriv kvantitativ odling
Vid odling av urinprov, Pinnen doppas i vätskan och stryks ut över hela plattan (inte superlätt tryck) en pinne innehåller ofta 10 ul
Vilka typer av blododlingsflaskor finns det och vad innehåller de?
Aerob och anaerob
Innehåller bla antibiotikaneutraliserande medel.
Finns pH indikationer i botten av flaskan som “signalerar” om en odling behövs.
Vilka är de tre primära typerna för klassificering/indelning av odlingsmedium?
- Fysisk form
- Kemiska karaktäristiska
- Funktionell typ/ syfte med mediet
Vad beskriver “Fysisk form” när man klassificerar odlingsmedium (a-d)
a, flytande
- Vattenbaserade lösningar som inte stelnar i rumstemperatur. Buljong, broth. Innehåller tex köttextrakt, peston mm
b, semisolid
- Trögflytande konsistens, vanligen använt vid mobilitets test - rörlighetstest. Man kan se om bakterierna sprider sig i lösningen eller inte, alltså om bakterien är orörlig eller rörlig.
c, fast men kan bli flytande
- Fast yta, kolonier växer på ytan - vanligen i petriskålar
- C1, Fast medium som kan bli flytande/stelnar, det absolut vanligaste mediumet vanligen Agar. Smälter vid 100 grader stelnar vid 42.
- C2, fast medium som förblir fast, tex kött, ägg
d, fast kan ej bli flytande
Vad beskriver “Kemisk karaktäristiska” när man klassificerar odlingsmedium (A,b)
a, syntetiskt - kemiskt definierat innehåll
- rena organiska och oorganiska komponenter, bestämda mängder, reproducerbara
b, icke syntetiskt - icke kemiskt definierat
- Minst en icke kemiskt definerbar beståndsdel extraherad från, djur, växter eller svampar - ex blod, serum, köttextrakt, infusioner (infusioner är rika på vitaminer, mineraler, proteiner och andra organiska näringsämnen.
Vad beskriver “Funktionell typ” när man klassificerar odlingsmedium (a-h)
a, allmänt syfte
- letar inte efter specifik bakterie
b, berikat
- kanske inte vet vad som odlas, vill komma åt de mer kräsna bakterierna också
c, selektivt
- Man vill bara hitta ex gramnegativa
d, differentierande
- Komplexa prover, flera olika sorter. Kan använda sig utav färger för att sortera
e, anaerobisk odling
f, transport
- Behövs en gynnsam miljö för bakterierna med de ska inte växa till
g, analys
- PBS
h, antalsberäkning
- Medier som används vid beräkningen. Kan frysa med speciella buljonger
Vad är ett generellt medium?
Designade för att kunna odla fram ett så brett spektrum av mikroorganismer som möjligt
- icke syntetiska
- ex. nutrient agar, brain heart infusion (BHI), tryptocase soy agar (TSA)
Vad är ett berikat medium?
Innehåller komplexa organiska substanser som tex blod, serum, hemoglobin eller specifika tillväxtfaktorer så som vitaminer och aminosyror.
Bra om man inte vet vad man letar efter, främst för att hitta kräsna bakterier, som alltså kräver mycket tillväxtfaktorer
Vad kallas bakterier som kräver tillväxtfaktorer och komplexa näringsämnen för att växa?
Ge ett exempel på en sådan
Fastidious/kräsna
Streptococcus pneumonie, som växer på blodagar
Vad är ett selektivt medium?
Ge exempel på medium
Designade för en speciell grupp/grupper av bakterier. Kan behövas vid mer komplexa prover, innehållande mycket olika bakterier för att man ska kunna hitta rätt.
Viktigt vid isolering av bakterier från komplexa med mkt bakterier, ex saliv, faeces, vatten, jord mm.
MSA - mannitol salt agar,
- höga koncentrationer NaCl, selekterar för Staphylococcus som tål höga saltkoncentrationer
MacConkey- Innehåller gallsalter, gallsalter inhiberar G+ bakterier och gynnar framväxt av G-stavar
Vad är ett differentierande medium?
Selekterar på storlek på kolonin eller färgomslag
Vanligt med färg och pH-indikatorer i plattor för tex påvisande av laktosjäsare- omslag till surt pH
Vad är transport medium?
Ge exempel på medium
För bevaring och preservering av olika organismer vid tex transport från provtagning till utodling på laboratoriet ska hålla en viss tid
Innehåller salt, buffertar och substanser som förhindrar pH omslag, tillväxt, toxiska substanser mm.
EX.
Stuart´s och Amies
Vad är analysmedium?
En trevlig miljö för bakterierna
Olika sorters medium som används för att tex lösa upp bakterier vid laboratorieanalyser- tex PBS vis resistensbestämning
