Bakteriell serologisk diagnostik

Question 1

Vad är serologi?

Answer 1

Vetenskaplig studie av serum och andra kroppsvätskor, men används slentrianmässigt som benämning på antikroppsbestämning i serum

Question 2

Nämn några för- och nackdelar med antikroppsbestämning

Answer 2

• Enkelt och robust, ofta automatiserat
• Användbar då mikroben är svår/omöjlig att odla eller detektera med PCR, samt för att se vaccinationsstatus
• Antikroppsanalys kan inte påvisa pågående infektion, bara att man varit exponerad
• Inte alla infektioner ger antikroppssvar
• Korsreaktivitet mellan närbesläktade organismer, vanligt hos IgM-antikroppar

Question 3

Nämn ett stort problem som finns vid alla serologiska analyser

Answer 3

Det är svårt att bestämma var gränsen går mellan positivt/negativt svar

Question 4

I vilka kroppsvätskor mäts antikroppar?

Answer 4

Serum, likvor

Question 5

I vilka kroppsvätskor mäts antigen?

Answer 5

Serum, likvor, BAL, feces, urin

Question 6

I vilket material mäts interferon?

Answer 6

Blodceller

Question 7

Vilka två övergripande kategorier av antikroppsanalyser finns?

Answer 7

1: Vaccinationsstatus
2: Infektion

Question 8

Nämn några exempel på antikroppsanalyser för att undersöka vaccinationsstatus (sjukdom, bakterie, provmaterial, analys)

Answer 8

Stelkramp (clostridium tetani)
Kikhosta (Bordetella pertussis)
Difteri (Corynebacterium diphtheriae)

Alla dessa mäts i serum mha ELISA

Question 9

Nämn några exempel på antikroppsanalyser för att undersöka infektion (mikroorganism, provmaterial, analys)

Answer 9

Grupp A streptokock: serum, neutralisationstest
Campylobacter: serum, ELISA
Borrelia: serum/likvor, kemiluminiscens
Treponema (syfilis): serum/likvor, ELISA/kemiluminiscens/agglutinationstest/flockningstest

Question 10

Nämn några exempel på antigentest (mikroorganism, provmaterial, analys)

Answer 10

Aspergillus (Galaktomannan): serum/BAL/likvor, Sandwich-ELISA
Övriga svampar ((1,3)-Beta-D-glukan): serum/BAL, limulustest
Legionella: Urin, snabbtest

Question 11

För vilken bakterie görs interferonanalyser? I vilket provmaterial? med vilken metod?

Answer 11

Mykobacterium tuberculosis, i blod, med ELISA eller ELISPOT

Question 12

Vilka fyra sjukdomsstadier finns för syfilis?

Answer 12

Primärt: ett sår på könsorganet ca 3v efter smittillfället som läker på några veckor

Sekundärt: 7-10v efter smittillfället, feber+svullna lymfkörtlar + utslag. En del får inga symtom/väldigt lindriga

Latent: få/inga symtom

Tertiärt: granulom i olika organ som kan ge bl a svåra neurologiska eller hjärtrelaterade symtom

Question 13

Kan syfilis odlas?

Answer 13

Nej

Question 14

Kan syfilis diagnosticeras med PCR?

Answer 14

Ja, i sårvävnad. Men inte i sena stadier.

Question 15

Vilka testas för syfilis?

Answer 15

Alla blodgivare och alla gravida, de med symtom och de i riskgrupp

Question 16

För att undersöka huruvuda en patient exponerats för syfilis, hur går diagnostiken till? Beskriv de två tester som görs

Answer 16

Treponema: CLIA - screeningmetod där man mäter om patienten har antikroppar mot framrenade syfilisantigen. Positivt prov konfirmeras med TPPA

TPPA (treponema pallidum particle agglutination assay): “gold standard”, positivt resultat visar att patienten har eller haft syfilis. Agglutinationstest där antikroppar mot syfilisantigentäckta gelatinpartiklar mäts i en spädningsserie

Question 17

För att undersöka huruvuda en patient har aktiv infektion med syfilis, hur går diagnostiken till? Vilka två tester görs? beskriv.

Answer 17

IgM-ELISA: bedömer om patienten har nydebuterad infektion, mäter IgM-antikroppar mot rekombinanta syfilis-antigen

VDRL (Veneral Disease Research Laboratory test): för att bedöma om patienten har pågående infektion. Ett flockningstest som mäter antikroppar mot cardiolipin, lecithin och kolesterol*. VDRL sjunker och blir ofta negativt efter behandling.

*dessa antikroppar uppstår även vid vissa andra infektioner, tex HIV.

Question 18

Hur tolkas följande resultat:

1: TPPA, IgM och VDRL är negativa
2: Specifika antikroppar uppmäts (TPPA) och aktivitetsmarkör (VDRL) är positiv
3: Specifikt IgM-svar uppmäts
4: IgM svar uppmäts och aktivitetsmarkör (VDRL) är positiv

Answer 18

1: patienten bedöms EJ ha syfilis
2: patienten kan ha en pågående syfilisinfektion. Kontakta venerolog
3: patienten har eller har nyligen haft en syfilisinfektion. Kontakta venerolog
4: patienten har sannolikt en syfilisinfektion i tidigt skede. Kontakta venerolog

Question 19

Beskriv tuberkulos. Vilken mikroorganism? Vad för smitta? Långsamt/snabbväxande?

Answer 19

Mycobacterium tuberculosis
Luftburen smitta
Mycket långsamväxande

Question 20

Beskriv tuberkulossjukdomen. Vilka patienter får vanligast sjukdomen? Hur lång är inkubationstiden? Vanligaste lokaliseringen i kroppen? Kan den finnas latent?

Answer 20

• Vanligast hos patienter med immunbrist
• Inkubationstid 2-5 år, men kan dröja decennier
• Lokalisering: lungorna
• Ja, många har den latent hela livet

Question 21

Vilka testas för tuberkulos?

Answer 21

• Alla flyktingar (frivilligt)
• Vissa som ska få anti-TNF-behandling
• Patienter med symtom
• Smittspårning
• Svenska soldater som stationeras utomlands

Question 22

Vad är principen för hur TB-exponering mäts?

Answer 22

Patientens T-celler får reagera på specifika TB-antigen. Om immunsystemet tidigare exponerats för TB kommer T-cellerna reagera med INF-gamma-frisättning

Question 23

Hur testas för TB-exponering? Hur många rör och vad innehåller varje rör? Vilken analys?

Answer 23

4 rör som inkuberas 16-24h och sedan tas supernatanten och testas med ELISA för gammainterferon

Rör 1: neg kontroll
Rör 2: innehåller 2 TB-antigen som aktiverar CD4+ celler
Rör 3: innehåller ett antal peptider som aktiverar CD4+ och CD8+ celler
Rör 4: innehåller mitogen - positiv kontroll

Question 24

Hur ser man till att inte TB-vaccinerade patienter får positivt utslag på testet?

Answer 24

TB-antigenen i rör 2+3 är andra antigen än de som ingår i vaccinet, vilket gör att vaccinerade patienter inte kommer få positivt utslag

Question 25

Var går gränsen mellan positivt och negativt svar på TB-testet?

Answer 25

OM [IFN-gamma] antigen minus [IFN-gamma] kontroll
> 35 IU/ml –> positivt
< 35 IU/ml –> negativt

För negativa prover måste även
mitogen < 0.5 IU/ml
annars kan inte provet bedömas som negativt

Question 26

Vilka patienter drabbas främst av invasiva svampinfektioner? Av vilka arter?

Answer 26

Patienter med nedsatt immunförsvar.

Candidaarter, Pneumocystis jiroveci, Aspergillus och Zygomyceter.

Question 27

Hur detekteras svamp?

Answer 27

Betaglukan (1,3)-b-D-Glukan

Question 28

Vad heter det uråldriga djuret vars blod används i diagnostiken?

Answer 28

Dolksvans/hästskokrabba

Question 29

Hur är dolksvansens blod och immunförsvar speciellt?

Answer 29

1. Det är blått
2. Det har ett unikt immunförsvar med enzymer som aktiveras både av LPS och betaglukan
3. Immunförsvaret innehåller även Limulus Amebocyte Lysate (LAL), ett geléliknande material som kan kapsla in bakterier

Question 30

Hur gör man för att få tag i de speciella enzym som finns i dolksvansens blod? Vad för svårighet måste man ha i åtanke?

Answer 30

De tappas på blod, man lyserar blodcellerna och sedan frystorkar man enzymen som släpps ut.

Dolksvansarna får inte dödas pga är fridlysta, så man måste vara försiktig och lämna dem levande.

Question 31

Var går gränsen mellan positivt/negativt svar för påvisande av LPS eller betaglukan?

Answer 31

Negativ <100 units/mL

Postiv >100 units/mL

Question 32

Vad är syftet med att ge exakt värde i analyssvaret vid påvisande av LPS eller betaglukan?

Answer 32

Att kunna följa behandlingsutfall