Brainscape's Knowledge GenomeTM

Browse over 1 million classes created by top students, professors, publishers, and experts.


See full index

BMA041 Mikrobiologisk och immunologisk metodik > Cellanalys - introduktion > Flashcards

Cellanalys - introduktion Flashcards

1
Q

Vad innebär en primär immunbristsjukdom? Ge ett exempel

A

En medfödd genetisk sjukdom som orsakas av att någon komponent i immunsystemet saknas/inte fungerar. Tex Kronisk granulomatös sjukdom (CGD)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Vad innebär en sekundär immunbristsjukdom? Ge ett exempel

A

Immunbristsjukdom som förvärvats under livet. Tex AIDS

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Vad innebär en autoimmun sjukdom? Ge ett exempel

A

En sjukdom som orsakas av att immunsystemet aktiveras av och reagerar mot kroppens egna molekyler. Tex MS, Graves sjukdom, SLE

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Vad är ett autoantigen?

A

Även kallat ett självantigen. En av kroppens egna molekyler som immunsystemet reagerar mot vid autoimmun sjukdom

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Vad innebär allergi?

A

Ett tillstånd orsakat av att immunsystemet aktiveras av, och reagerar mot, ofarliga molekyler i omgivningen eller födan (allergener)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Vad är immunoassay? Vilken princip använder den?

A

En laboratoriemetod som används för att detektera eller kvantifiera en molekyl med hjälp av den specifika bindningen mellan antikropp och antigen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Vilka immunologiska metoder kan detekteras mha synen?

A

Agglutinationstest (bygger på agglutination) och immunodiffusion (bygger på precipitation/utfällning)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Vilka immunologiska metoder kräver maskiner för detektion? Vilka principer bygger de på?

A
  • Turbidimetri, nefelometri - bygger på ljusspridning

Detektion mha antikropp/antigen märkt med detektionsmolekyl:

  • ELISA, ELISPOT - enzym som detektionsmolekyl
  • RIA - radioaktiv isotop som detektionsmolekyl
  • FACS, immunfluorescens - fluorokrom som detektionsmolekyl
  • CLIA - kemiluminescent tags som detektionsmolekyl
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Vad används cellanalyser för inom klinisk immunologi? Ge exempel på några celler som kan analyseras

A

Används ffa för diagnos av immunbristtillstånd och uppföljning av patienter som genomgår immunterapi, men även för diagnostik av överaktivitet i immunsystemet (autoimmunitet, allergi)

Tex fagocyter, lymfocyter, B-celler, T-celler

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Vilka vävnadsprover används för analys av immunceller?

A

Ffa i blodprover, men ibland även i CSF, BAL, och vävnadsextrakt

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Hur prepareras blodproverna för cellanalys?

A

Ofta separeras immuncellerna från blodkropparna först,

  • Densitetsgradientcentrifugering (lymfoprep, ficoll)
  • Osmotisk lysering av röda blodkroppar (tex mha ammoniumklorid)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Hur går Densitetsgradientcentrifugering till?

A
  1. Till blodprovet tillsätts NaCl
  2. I ett separat rör tillsätts ficoll/lymfoprep, en tjock och seg vätska
  3. Blod-NaCl-blandningen tillsätts till röret försiktigt så det inte blandas
  4. Centrifugering
  5. Röda blodkroppar och granulocyter hamnar i botten, medan PBMC (peripheral blood mononuclear cells) hamnar överst
  6. PBMC cellskiktet sugs av och är redo för analys
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Vad står PBMC för? Vilka celler ingår?

A

Peripheral blood mononuclear cells

Lymfocyter + monocyter

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Varför vill man ta bort neutrofilerna vid densitetsgradientcentrifugering?

A

För de kan släppa ut farliga ämnen som skadar de andra cellerna

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Hur kan rena cellpopulationer (tex endast T-celler) isoleras från PBMC?

A

Olika celltyper kan isoleras mha monoklonala antikroppar mot unika cellytemolekyler som uttrycks av respektive celltyp.

Dessa märks/binds med olika molekyler med egenskaper som kan användas för separation (tex fluorokromer - FACS, magnetkulor)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Vilka unika cellytemolekyler har de olika celltyperna (T-, B-celler och monocyter)?

A

T-celler: CD3
B-celler: CD19, CD20
Monocyter: CD14

17
Q

Hur går isolering med magnetiska kulor till?

A
  1. Monoklonala antikroppar kopplas till magnetiska kulor, AK binder till den valda celltypen
  2. Blandningen sätts i ett rör med öppning i botten, med magnet runt
  3. De inmärkta cellerna hålls fast av magnetfältet medan de omärkta cellerna åker ut ur öppningen ner i ett rör under
  4. Ett nytt rör sätts under och magneten tas bort, de inmärkta cellerna släpps ut
18
Q

Vilka två typer/indelningar av cellanalyser finns det?

A

Fenotypiska cellanalyser: “hur ser celltypen ut och hur många celler finns det som ser ut så?”

Funktionella cellanalyser: “Hur fungerar celltypen”

19
Q

Ge exempel på några frågor som kan besvaras av fenotypiska cellanalyser?

A
  • Hur många T-celler, B-celler och NK-celler finns det per ml i ett blodprov?
  • Är T-cellerna aktiverade (uttrycker de aktiveringsmarkörer)?
  • Vandrar T-cellerna till lymfknuta (uttrycker de vissa homingreceptorer)?
20
Q

Vilken är den typiska analysmetoden/testet som används vid fenotypiska cellanalyser?

A

Flödescytometri

21
Q

Ge exempel på några frågor som kan besvaras av funktionella cellanalyser?

A
  • Kan fagocyter fagocytera på ett normalt sätt?
  • Kan T-cellerna dela sig på normalt sätt?
  • Kan B-cellerna producera antikroppar på ett normalt sätt?
22
Q

Efter stimulering av helblod eller isolerade immunceller genomförts, vilka analysmetoder/tester är vanliga vid funktionella cellanalyser?

A

Flödescytometri, radioaktivitet, ELISPOT

23
Q

Ge exempel på stimuli som aktiverar många/alla monocyter/makrofager

A

TLR-ligander - tex LPS, CpG DNA

24
Q

Ge exempel på stimuli som aktiverar många/alla B-celler

A

Lektiner (PWM tex), Epstein-Barr Virus

25
Q

Ge exempel på stimuli som aktiverar många/alla T-celler

A

Lektiner (PHA tex), anti-CD3-antikroppar

26
Q

Ge exempel på specifika antigen som kan aktivera T-celler specifikt via T-cellsreceptorn

A

Stelkrampstoxoid, peptider från cytomegalovirus (de flesta personer har CMV latent), influensavirus

27
Q

Vad är en lektin? Hur funkar de?

A

Kolhydratbindande protein som korsbinder kolhydrater på immuncellernas ytaoch därmed aktiverar dem och får dem att börja dela sig

28
Q

Hur sker celldelningsanalys av T-celler genom inkorporering av radioaktivt tymidin? Vad kan det ge mått på?

A 
PBMCs tillsätts i brunnar (lika många i varje). Olika saker tillsätts till dem:
Brunn 1: negativ kontroll
Brunn 2: Antigen A
Brunn 3: Antigen B
Brunn 4: positiv kontroll (lektin)

Efter 3-5 dagar undersöks tillväxten. Cellerna delar sig endast om man har minnesceller mot antigenet.

Radioaktivt thymidin inkorporeras ENDAST i prolifererande celler. Obundet thymidin tvättas bort, sedan mäts radioaktiviteten hos cellerna. Man får endast utslag hos de celler som delat sig och man kan därmed få ett mått på celldelningsförmågan hos T-cellerna.

29
Q

Vad står ELISPOT för?

A

EnzymeLinked ImmunoSPOT

30
Q

Vad är principen för ELISPOT?

A

Samma princip som Sandwich eller indirekt ELISA, men istället för att mäta absorbans i en lösning räknas färgprickar (spots) på ett membran

31
Q

Vad analyseras vid ELISPOT?

A

Förmågan hos celler att producera ett visst protein. En spot = en cell som producerar det eftersökta proteinet

32
Q

Vad kan detekteras vid ELISPOT?

A
  • Samtliga celler som producerar ett visst protein
  • Antigenspecifika T-celler (cytokinproduktion analyseras)
  • Antigenspecifika B-celler (antikroppsproduktion analyseras)
33
Q

Vilka är de viktiga stegen i ELISPOT när man analyserar antikroppsproducerande celler?

A
  1. Tag blodprov och isolera PBMCs med densitetsgradientcentrifugering
  2. Sätt PBMC i olika brunnar på cellodlingsplatta
  3. Stimulera några brunnar, lämna några ostimulerade, inkubera några dagar
  4. Skörda, räkna och späd cellerna till olika koncentrationer och flytta dem sedan till en platta coatad med anti immunoglobulin-antikropp
  5. Tvätta bort cellerna, tillsätt detektionsantikroppar (inkubera över natt, tvätta
  6. Tillsätt extravidin, tvätta, tillsätt enzymsubstrat, tvätta
  7. Räkna spots = antalet celler som producerar IgG/A/M (vilken man nu valt att undersöka)
34
Q

Varför späder man cellerna vid ELISPOT?

A

För att man inte vet hur mycket antikroppar/annat som cellerna kommer producera och man vill hitta en lämplig spädning där man kan räkna prickarna enkelt

35
Q

Beskriv metodprincipen/stegen för ELISPOT vid analys av cytokinproducerande celler

A
  1. Capture-antikroppar sätts i botten på brunnen
  2. Stimulering av PBMCs med antigen så att cytokinerna börjar produceras och fångas av antikropparna
  3. Tvätt + tillsats av detektionsantikropp konjugerad med biotin
  4. Tillsats av streptavidinkonjugerad ALP
  5. Tillsats av kromogensubstrat
36
Q

Ge exempel på ELISPOT-analyser samt vad plattorna coatas med för varje analys

A
  • Analys av antal immunoglobulinproducerande B-celler i ett prov (diagnostik av patienter med B-cellsdefekter). Platta coatad med anti IgG/A/M
  • Analys av antal B-celler som producerar antikroppar specifika för mikroorganismer/vaccin för diagnostik av patienter med B-cellsdefekter. Platta coatad med vaccinantigen
  • Analys av antal T-celler som producerar en viss cytokin (tex INF-gamma) för diagnostik av patienter med immundefekter. Platta coatad med anti-INF-gamma-antikroppar
37
Q

Vilka skillnader finns mellan ELISA och ELISPOT?

A

I ELISA mäter man koncentrationen av AK/proteiner i en lösning. Enhet: titer eller pg/ml
vs
I ELISPOT mäter man antalet celler som producerar AK/protein i ett prov

ELISA är mindre komplicerad och lättare att standardisera och robotisera än ELISPOT

ELISPOT är en mkt känslig metod som används mycket inom forskning och för vissa kliniska analyser
vs
ELISA används flitigt inom både diagnostik och forskning

BMA041 Mikrobiologisk och immunologisk metodik (15 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2024 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions