Färgningsmetodik

Question 1

Preparatframställning - vilka steg måste genomföras innan färgningen?

Answer 1

1. Mha plattinös tas lite bakterier från agarplattan
2. Bakterierna blandas ut i en droppe PBS på objektsglaset
3. Bred ut till ett tunt, encelligt, lager
4. Lufttorka alternativt värmefixera med bunsen

Question 2

Vilka två kategorier delas färgerna generellt in i?

Answer 2

Basiska (katjonfärger) och sura (anjonfärger)

Question 3

Vilken laddning har katjonfärger (basiska)?

Answer 3

Positivt laddade

Question 4

Vilken laddning har anjonfärger (sura)?

Answer 4

Negativt laddade

Question 5

Vilken sorts färg färgar in bakterier bäst - sura eller basiska? Varför?

Answer 5

Basiska färger eftersom bakterier har mycket negativt laddade/sura beståndsdelar

Question 6

Vad kan sura färger användas till vid bakteriefärgning?

Answer 6

Negativ färgning

Question 7

Vad betyder positiv och negativ färgning?

Answer 7

Positiv färgning: färgen binder till bakterien och ger en färg

Negativ färgning: färgen binder runtom bakterien, det blir som ett negativt fotografi

Question 8

Ge exempel på negativa färger. Är de sura eller basiska?

Answer 8

Nigrosin och india ink. De är sura färger.

Question 9

Vilken beståndsdel kan negativ färgning framhäva?

Answer 9

Kapseln

Question 10

Vad innebär enkel färgning?

Answer 10

Färgar endast med en färg

Question 11

Vad innebär differentialfärgning?

Answer 11

Färgar med 2 olika färger - en primärfärg och en “motfärg”

Question 12

Ge exempel på vilka lösningar som kan användas för att avfärga basiska färgämnen

Answer 12

Sura lösningar, tex alkoholer

Question 13

Vad är principen för gramfärgning?

Answer 13

Kristallviolett (ingår i gentianaviolett) komplexbinds till jod när Lugols lösning (kaliumjodid) tillsätts

Question 14

Vilka faktorer hos bakterien kan påverka gramfärgningens effektivitet? Nämn 2.

Answer 14

• Bakteriearten. Graden av G+/G- varierar hos olika arter

- Bakteriernas ålder

Question 15

Vilka steg ingår i gramfärgning?

Answer 15

1. Fixering
2. Kristallviolett
3. Lugol
4. Avfärgning (tex alkohol)
5. Kontrastfärgning (saffranin)

Question 16

När bakterier delar sig hänger de ofta ihop i karaktäristiska delningsformer för olika arter. Vilka arter har dessa delningsformer:

• Diplokock
• Klasar
• Kedjor

Answer 16

Diplokock: pneumokock
Klasar: Stafylokock
Kedjor: Streptokock (en bra minnesregel är stREPtokocker - rep liknar kedjor)

Question 17

Vilken färg får G- bakterier vid gramfärgning?

Answer 17

Ljust rosa/röda

Question 18

Vilken färg får G+ bakterier vid gramfärgning?

Answer 18

Mörkt lila/blå

Question 19

Hur färgar man syrafasta bakterier? Vilken färg blir syrafasta vs icke syrafasta bakterier?

Answer 19

Med Ziehl-Neelsen.
Syrafasta: rosa
Icke syrafasta: blå

Question 20

Ge exempel på bakteriefamilj som måste färgas med Ziehl Neelsen. Varför?

Answer 20

Mykobakterier. För att de är mycket svåra att färga på grund av lipider i cellväggen

Question 21

Hur färgar man sporer?

Answer 21

Schaeffer-Fulton Endospore stain

Question 22

Hur går Schaeffer-Fulton Endospore stain till i jämförelse med vanlig preparation? Vilket färgämne + kontrast används? Vilken avfärgning?

Hur ser resultatet ut?

Answer 22

Hårdare fixering, längre tid och med högre temperatur.

Malakitgrönt används, med saffranin som kontrastfärg. Avfärgning sker med vatten mellan de två stegen.

Sporerna blir gröna och övriga strukturer blir röda.

Question 23

Varför krävs specialfärgning för att färga in flageller?

Answer 23

De är för små. Färgningstekniken går ut på att färg läggs på flagellerna i lager tills de blir tjocka nog att synas

Question 24

Vilken flagellfärgning används till blött preparat? Vilken används för torrt?

Answer 24

Blött: RYU - flagella stain

Torrt: Leifson

Question 25

Varför måste flagellfärgning göras på färska odlingar?

Answer 25

På gamla odlingar kan flagellerna ha förstörts

Question 26

Vad färgar Acridine orange?

Answer 26

Det interagerar med ds DNA och fluorescerar med orange färg. Gör det lättare att visualisera bakterier i preparat.

Question 27

Vad färgar FA-färgning (direkt fluorescensce ab)?

Answer 27

Fluorosceon-iso-thio-cyat inmärkta antikroppar används för bl.a. identifiering av virus tex influensa.

Avläses i UV-mikroskop

Question 28

Vad innebär “hängande droppen”? hur går det till?

Answer 28

Det är metoden för att studera levande bakterier med mikroskop.

En droppe flytande bakteriekultur/slamning i vatten/koksaltlösning från fast kultur placeras på mitten av ett täckglas. Ett urholkat objektglas läggs ovanpå och det hela vänds snabbt upp och ner så att droppen hänger fritt från täckglaset.

Question 29

Hur studeras generellt levande bakterier?

Answer 29

Ofärgade i “hängande droppen” eller i faskontrastmikroskop

Question 30

Vad lämpar sig “hängande droppe” för?

Answer 30

I stort sett enbart för observationer av bakteriers rörelseförmåga och rörelsesätt

Question 31

Hur förbereds provet inför mikroskopering?

Answer 31

Värmefixering eller kemisk fixering

Question 32

Varför får bilden högre upplösning om preparatet fixerats före oljeimmersionen?

Answer 32

För att utfällt protein har ett väldigt likt brytningsindex som oljan medan proteinlösning (så som det är i cytoplasman) har ett betydligt lägre index.

Fixerade celler syns mycket klarare i immersionen och möjliggör en mer detaljerad observation av deras färgade delar.

Question 33

Vad kan man se i faskontrastmikroskop? Vad kan man inte se?

Answer 33

Kan: form, storlek och vissa cellstrukturer hos levande bakterier

Kan inte: kemisk sammansättning av strukturerna. detta uppnås genom färgning med selektiva färgämnen