Brainscape's Knowledge GenomeTM


Top Flashcards (Certified)
All Flashcards

BMA041 Mikrobiologisk och immunologisk metodik > ELISA och CLIA > Flashcards

ELISA och CLIA Flashcards

1
Q

Vad står ELISA för?

A

Enzyme Linked ImmunoSorbent Assay

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

Vilka olika varianter av ELISA finns?

A

Direkt, indirekt, sandwich och kompetitiv

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Nämn några användningsområden för ELISA

A

Detektion av antikroppar och antigen:

  • vid bestämning av serumantikroppar
  • vid detektion av virusantigen
  • vid detektion av födoämnesallergener inom industrin

Detektion av olika läkemedel
Vid analys av olika biologiska substanser (tex TNF-alfa, interferoner, hormoner..)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

Nämn några djur som man kan få antikroppar från

A

Mus, råtta, kanin, häst, får, get

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Vad är polyklonala antikroppar?

A

Multipla antikroppar som binder till samma antigen (men olika epitoper)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Vad är monoklonala antikroppar?

A

Specifika antikroppar som endast binder till en del av antigenet (en epitop)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Vilka antikroppar används vid ELISA - polyklonala eller monoklonala?

A

Monoklonala

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Hur framställer man monoklonala antikroppar, steg för steg?

A

Först infekteras värddjuret, tex en mus, med antigen. Sedan sker tre saker:

  1. B-celler tas från mjälten. De kan producera AK, överleva i HAT medium men dör efter några dagar
  2. B-cellerna kombineras med cancerceller (kan ej leva i HAT-medium, men kan dela sig obegränsat)
    3: B-cellshybridomen överlever i HAT-medium, delar sig obegränsat och producerar antikroppar som kan skördas
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

Vilka olika sätt finns för att framställa B-cellshybridomen?

A
  • Elektrisk cellfusion
  • Polyetylenglykolcellfusion
  • Zendai-virusinducerad cellfusion
  • Optiskt kontrollerad termoplasmonik (nyutvecklad metod)
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

Ge en kort översikt över stegen i ELISA-metoden

A
  1. Coating av platta (antigen/antikropp)
  2. Blockering
  3. Tillsättning av prov
  4. Detektionsantikropp
  5. Substrat
  6. Avläsning
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Beskriv en ELISA-platta

A

96 hålsplatta

Gjord av plast som binder proteiner effektivt (sätter antigen/antikropp i botten)

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Vad används för Coatnings-buffert?

A

Fosfatbuffert (PBS) eller karbonatbuffert.
Viktigt att den inte denaturerar ak/ag samtidigt som bindningen maximeras.
pH varierar, olika ak föredrar olika pH. Dock oftast neutralt

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Vad används för blockering?

A

1% bovin serum albumin
1% torrmjölk
10% kalvserum (FKS)
spädas med PBS/Tween

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Vad är syftet med blockeringssteget?

A

Att se till att inga tomma ytor finns i plasten - förhindrar ospecifik inbindning

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Varför bör proverna spädas innan ELISA?

A

Dels för att spara på prov och dels för att signalen annars blir för stark

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Vilken provtyp används oftast vid antigenmätning?

A

Supernatanter från cellodling eller serum/plasma från patienter

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
17
Q

Hur späds standarden för kvantifiering?

A

Seriespädning av en känd koncentration av antigenet som ska mätas. Spädningen sker i blockeringslösning med Tween

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
18
Q

När används standardkurva för ELISA? Vilka storheter finns på axlarna?

A

När antigenkoncentrationen ska mätas (Sandwich eller inhibitions-ELISA)

Koncentrationen plottas mot absorbansen

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
19
Q

Vad används som negativ kontroll vid ELISA?

A

Bufferten som används för att späda standarden och/eller cellodlingsmedium utan celler (blank).

INGA ANTIKROPPAR

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
20
Q

Vad är detektionsantikroppen för typ av antikropp?

A

Poly- eller monoklonal

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
21
Q

Vad konjugeras detektionsantikroppen med?

A

Vanligtvis med ALP eller HRP (horseradish peroxidase), samt biotin och avidin/streptavidin

22
Q

Varför behövs endast en typ av sekundär antikropp för att kunna binda till många typer av primära antikroppar?

A

Eftersom Fc-domänen på antikroppen är konstant inom samma djurklass så kommer samma sekundära antikropp att kunna binda in till alla primära antikroppar

23
Q

Vilken färg har substratet?

A

Substratet är färglöst

24
Q

Hur färgas produkten i ELISA?

A

Med hjälp av en kromogen som blir färgad när det omvandlas av det konjugerade enzymet

25
Vilken färg får HRP + TMB?
Blå
26
Vilken färg får ALP + pNPP?
Gul
27
Vilken färg får HRP + ABTS?
Grön
28
Vad kan tillsättas som stopplösning för att stoppa färgreaktionen?
Fosforsyra
29
Vad används spektrofotometern till i ELISA?
För att avläsa hur färgad produkten blivit
30
Vad innebär känslighet vid ELISA? Vad har ELISA för känslighet?
Känslighet = den lägsta antigenkoncentrationen som kan mätas, som ger högre absorbans än negativ kontroll Vid ELISA är känsligheten beroende av vilket antikroppspar som används, men vanligtvis ca 5-10 pg/mL
31
Hur lång tid tar en ELISA?
``` Coating: över natt Blockning 1-2h Provtillsättning, inkubation 1-2h Detektionsantikropp, inkubation 1-2h Substrat, inkubation 10-15 min ``` Totalt: 15-18h
32
Hur går en direkt-ELISA till?
- Bindning av ag/ak direkt till botten i brunnen - Märkt primärantikropp - Substrat - Avläsning med spektrofotometer
33
Vad har direkt ELISA för fördelar och nackdelar?
Fördelar: - Snabb - bara en AK krävs - Liten risk för korsreaktion Nackdelar - Märkt primärantikropp - lägre immunoreaktivitet - Dyrt och tidskrävande att märka alla antikroppar - Lägre flexibilitet - Låg signalstyrka
34
Vad används indirekt ELISA vanligtvis till?
Detektion av antikroppar Provet innehåller eventuella antikroppar som binder till antigen i botten på plattan
35
Vad har indirekt ELISA för fördelar och nackdelar?
Fördelar: - Stor variationsmöjlighet - Många kommersiella märkta sekundärantikropp tillgängliga - Ingen märkning av primärantikroppen Nackdelar: - Korsreaktioner kan förekomma - Extra inkubationssteg krävs
36
Vad är principen för Sandwich ELISA
Två olika antikroppar behövs. En fäst till botten: "capture-antikropp" och en detektionsantikropp som fäster till antigenet (provet) när det väl bundit till capture-antikroppen. Viktigt att de två antikropparna känner igen olika epitoper på antigenet så de kan binda från varsitt håll
37
Vad har Sandwich ELISA för fördelar och nackdelar?
Fördelar: Hög specificitet – två antikroppar Passar komplexa prover Nackdel: Antigen måste innehålla minst två antikropps-bindningsställen
38
Vad finns det för två olika versioner av kompetitiv ELISA?
1) okänd mängd antigen i provet, solid fas med ak | 2) okänd mängd antikroppar i provet, solid fas med ag
39
Vid kompetitiv ELISA, vad är enzymaktiviteten proportionell mot?
Mängd bundet märkt antigen/antikropp
40
Vad finns det för fördelar med kompetitiv ELISA?
Fördelar: Orena prover kan användas vid komplexa mixer – kräver ej rening Hög reproducerbarhet Nackdelar: Generellt lägre känslighet och specificitet.
41
Vilka felkällor kan ligga bakom en falskt positiv kontroll? (alltså ett positivt svar på en kontroll som borde varit negativ)
otillräcklig tvättning, fel spädning, otillräcklig blockering, kors-reaktion
42
Vilka felkällor kan ligga bakom en falskt negativ kontroll? (alltså ett negativt svar på en kontroll som borde varit positiv)
ej korrekt coating, | felaktig ordning på reagenter, icke matchande antikropp, inhiberande kontamination
43
Vilka felkällor kan ligga bakom en svag signal?
ej riktig tvättning, otillräcklig inkubation, inhiberande kontamination, felaktigt substrat, otillräcklig coating, förlust av detektionsantikropp vid tvätt/blockering
44
När används titer för ELISA?
Vid dataanalys när man inte kan göra en koncentrationsbestämning (mätning av specifika antikroppar).
45
Vad innebär titer?
Titer = den inverterade spädningen där provet har högre signal än bakgrunden (punkten finnes vanligtvis 0,4 absorbansenheter över bakgrunden)
46
Vad står CLIA för?
ChemiLuminescence ImmunoAssay
47
Vad är den övergripande principskillnaden mellan ELISA och CLIA?
ELISA använder sig av colorimetri för mätning av aktiviteten/inbindningen, medan CLIA använder sig av luminescens.
48
Vad mäts luminescens i för enhet?
RLU - relative light units
49
Vad är skillnaden mellan CLIA och CMIA?
CLIA använder sig av brunnar (precis som ELISA), medan CMIA istället använder sig av små beads där ak/ag är bundet på ytan
50
Vad står CMIA för?
Chemiluminescent Microparticle ImmunoAssay

BMA041 Mikrobiologisk och immunologisk metodik (15 decks)

Brainscape helps you reach your goals faster, through stronger study habits.
© 2025 Bold Learning Solutions. Terms and Conditions