Sindromes linfo-proliferativos agudos Flashcards
Marcadores de imaturidade cels B
- CD38:
As células B na medula expressam CD38 e este marcador vai-se mantendo, mas nos últimos
estadios diminui e à periferia os linfócitos B já não são CD38+, mas sim CD38- - CD34
Em estadios mais avançados ainda na medula óssea, deixa de ser expresso - TdT
Enzima que adiciona nucleótidos aquando da recombinação hematopoiética das cadeias
pesadas e leves da imunoglobulina, para aumentar a sua diversidade.
Em estadios mais avançados ainda na medula óssea, deixa de ser expresso - CD79 é mais madura já, como CD20
- CD10 também e marcador imaturo
Citometria fluxo
- Cada ponto representa uma célula
- SSC – side scatter – é uma leitura física da granularidade das células —> É refletida mais luz quanto mais granular for o citoplasma da célula, ou seja, células mieloides refletem muito mais a luz
- FSC - forward sketer - é uma medida física do tamanho da célula. Temos de pensar nele como
a sombra da célula. A luz do laser atravessa a célula e há leitores da quantidade de luz que
atravessa essa célula - Podemos marcar as nossas células com anticorpos monoclonais (que se ligam a um epítopo
antigénico) contra os antigénios que quisermos– ex: CD19 é marcador de células B. Se quisermos ver células B podemos utilizar um anticorpo
monoclonal que só marque CD19
Ac monoclonais na Citometria de fluxo
São anticorpos monoclonais que marcam antigénios que definimos, ligados a um determinado
fluorocromo que, quando estimulado, emite luz num comprimento de onda específico.
A intensidade dessa luz é tanto maior quanto maior for a intensidade de ligação do anticorpo
monoclonal ao antigénio, o que nos permite inferir à cerca da concentração/frequência do tal
antigénio à superfície da célula.
O que permite a citometria de fluxo?
Identificar, Enumerar e caracterizar células
- boa para seguimento de doentes e da doença e ajuda a melhorar o tratamento
Fenótipos aberrantes
- Expressão de antigénios de uma linhagem noutra linhagem - EX: CD19+CD5+ na LLC (Leucemia Linfática Crónica)
- CD1, CD2, CD3, CD4,
CD5, CD6, CD7 (os mais pequenos) são
marcadores de células T - Expressão antigénica assíncrona - Ex: CD19+CD10+ em sp no Linfoma folicular
- Sub ou sobre - Ex: CD20+++ na Tricoleucemia
- Dispersão luminosa anómala - Ex: grandes e pequenos linfocitos em Linfoma não hodgkin B
Leucemia
- Leucemia significa que as células B circulam no sangue periférico e conseguimos, colhendo sangue ou fazendo uma análise normal, ver as células aberrantes
Leucemia linfática crónica
- Doença de células B maduras
- CD19 - marcador de célula B madura
- CD5 - marcador de células T, ou seja, não faz sentido
encontrar-se na célula B, mas é precisamente por isso
que se trata de uma célula B aberrante - Estas células B
aberrantes CD19+ CD5+
são características de LLC.
Linfoma folicular
- Crescimento de células B maduras
- CD10 – marcador de imaturidade, ou seja, não é provável vê-lo num linfoma de
células maduras, mas acontece. Estas células expressam de uma forma assíncrona o CD10.
Tricoleucemia
- “Leucemia dos linfócitos cabeludos” - células B com prolongamentos
citoplasmáticos que se veem muito bem ao microscópio ótico - O problema aqui não está no CD20, mas sim no facto de este ser MUITO positivo
(+++) - Linfócitos normais seriam CD20 intermédios na régua da citometria e estes
estão no topo (hiperintensidade de CD20).
Tipo de amostras passadas no citómetro
- Sangue periférico
- Sangue medular
- Líquidos biológicos (LCR, ascítico, pleural, LBA, saliva, vítreo, …)
- Biópsias e aspirados ganglionares ( Sempre que podemos fazemos uma biopsia excisional porque não se consegue ver estrutura de linfoma numa biopsia de agulha ou aspirado onde só vemos as células “soltas”; importante termos tecido à frente; Muitas vezes, quando é pouco provável que se trate de uma doença neoplásica, podemos
começar por esta abordagem do aspirado e da sua análise por citometria.) - Massas suspeitas de LNH ( tec. cerebral, tubo digestivo, etc)- em locais em que a biopsia excisional tinha de ser por toracotomia ou laparotomia pode-se fazer biopsia guiada por imagem
Ciclo celular e citometria de fluxo
- Também se pode medir o ciclo celular na citometria
- Utilizando marcadores que se ligam ao DNA (Células que estão em G0/G1; Células que estão em G2/mitose)
- Em doenças muito agressivas, as células estão sempre em mitose e podemos não ter uma
amostra de anatomia patológica que o permita reconhecer. Assim, basta termos um aspirado e
pedir ao citometrista que identifique quantas células estão a “ciclar” na amostra
Reconhecer padrão normal
- SS nas abcissas
- CD45 nas ordenadas
- CD45 – marcador leucocitário
- Quanto mais para a direita na régua do SS, mais complexos os leucócitos
- Blastos são células percursoras
- Marcam com CD45 fraco
- As mais diferenciadas têm CD45 mais forte
Marcadores de imaturidade T
- CD34
- CD10
- TdT
- Depois ao longo da maturação temos cd4 ou cd8+
Marcadores pan-T
- CD5 E CD3 (+ UTILIZADOS)
- CD2
- CD7
Marcadores progenitor B
CD19, CD34, CD10, TdT
Marcadores Cel pre -B early (Pro b)
CD19, CD24, CD10, CD34, CD22 (fraco), TdT
Marcadores cel pre-B
CD19, CD24, CD20, CD10, CD22, TdT
Marcadores naive cels B
CD79. CD19, CD24, CD22, CD20
Marcadores cels pro-T
CD2, CD7, CD34
Marcadores cels Pre-T duplo neg
CD2, CD5, CD7, CD1A, CD34, TCRgamma, TCR delta
Marcadores cels duplo positivos (corticais iniciais)
CD10, CD2, CD3 (FRACO), CD4, CD5, CD7, CD8, CD1A, Pre-TCR beta
Marcadores cels corticais finais duplo pos
CD2, CD3, CD4, CD5, CD7, CD8, CD1A, TCR alfa beta
Marcadores cels pre-B transicionais
CD19, CD79, CD24, CD20, CD22, TdT
Marcadores cel madura T single pos
CD2, CD3, CD5, CD7, CD8, TCR ALFA BETA
OU
CD2, CD3, CD5, CD7, CD4, TCR ALFA BETA
cels no Gânglio linfático
- Células que já completaram o seu desenvolvimento e estão lá a atuar (B ou T)
- Células B a terminar o seu desenvolvimento hematopoiético
Leucemia infática crónica
- Vamos agora pensar numa célula B naive que acabou de vir da medula óssea, ainda não
encontrou o seu antigénio alvo (célula B encontra o antigénio no centro germinativo) - Se esta célula B naive antes de entrar no centro germinativo sofrer alteração genética pode dar
origem a uma doença clonal (doença em que as células são todas iguais entre si) - A hipermutaçao somática só ocorre nos centros germinativos, depois da célula se encontrar com
o antigénio. Esta mutação ocorre na parte variável das cadeias da imunoglobulina, parte que liga
o antigénio. Sofre mutação por via a que os linfócitos B tenham maior probabilidade de se ligarem
a muitos antigénios que possam aparecer
Leucemia linfática crónica mutada
Uma célula B que já passou o centro germinativo e ja sofreu hipermutação somática
- O prognóstico da LLC não mutada é muito pior
- LLC é a 2ª neoplasia hematológica mais frequente
Alterações celulares no centro germinativo dão origem a que doenças?
- Linfoma folicular – linfoma indolente
- Linfoma de Burkitt – linfoma agressivo
- DLBCL (Diffuse Large B cell Lymphoma) – linfoma agressivo
- Linfoma de predomínio linfocitário
- Doença de Hodgkin
Mieloma multiplo tipo de células
As células B mais diferenciadas são os plasmócitos e alterações nestas células dão origem a
mieloma múltiplo, sendo que estas células já são hipermutadas (pós centro germinativo).
Linfoma marginal
- origina-se nos linfócitos da zona marginal (periféricos no gânglio linfático);
- é indolente (quer dizer que responde muito bem ao tratamento, ficando as
pessoas em remissão completa (não quer dizer que fiquem curadas); tem
sobrevivências muito longas, no entanto, sabemos que a doença normalmente
recai, mas iniciando de novo o tratamento esta volta a responder bem);
Linfoma do manto
- origem nas células da zona do manto
- agressivo- (significa que sem tratamento as pessoas vão morrer, sendo a sua
sobrevivência mediana muito fraca) - a sobrevivência tem vindo a aumentar bastante com novas terapêuticas que têm
surgido (a sobrevivência sem tratamento é inferior a 2 anos) - Expressa CD5
Agudo vs crónico
- Agudo
# está relacionado com a proliferação de células mais imaturas (não é sempre
assim, mas no geral verifica-se a associação)
# classificação clínica –>quer dizer que a situação se impôs à pessoa há pouco
à tempo (a pessoa sabe perfeitamente localizar no tempo o início dos sintomas
à histórias muito bem definidas
temporalmente);
# normalmente associadas a doenças mais agressivas (mas também podemos ter
doenças crónicas agressivas —> histórias agudas de doenças crónicas); - Crónico
# Classificação clínica
–> a situação “desfaz-se no tempo” (ex :”tenho andado
à cansado” ou “tenho perdido peso” – não conseguem localizar o momento de
forma exata);
Divisão com base na fase de maturação
- Origem nos percursores: medula óssea (TDT, CD10, CD19 – LLA/ LINFOMA LINFOBLASTICO)
- Origem em células já periféricas mas ainda não tiveram
contacto com os antigénios: sangue periférico ( CD5, CD23) - Origem nas células em diferente fase de maturação no gânglio linfático ( pre- CD5 LINFOMA MANTO, no centro germinativo CD10, CD20, BCL-2- BURKITT, FOLICULAR, DIFUSO CELULAS GRANDES ou pós centro germinativo- CD38, CD138- ZONA MARGINAL, MALT, LINFOPLASMOCITICO, LLC/SLL, DIFUSO CELULAS GRANDES, MIELOMA MULTIPLO)
CD20+, CD19+ CD5+
Linfoma manto ou leucemia linfática crónica
Leucemias linfoides agudas
- classificação e diagnóstico de leucemias agudas feitos com base na clinica, morfologia, imulogia e analise genética
- antigamento as leucemias linfoblasticas agudas eram L1, L2 e L3 ( agora designada por Burkitt) –> cels de L3 tem vacuolos
Indice de ploidia (DNA index)
- Se >1,15 –> hiperploidia (n>50)
- Se estiver entre 1 e 1,15 –> diploide/hiperploide (47>n>50)
- > se <1 –> hipoploide (n<46)
- Podemos ter um índex DNA normal (1 a 1,15) e mesmo assim ter uma doença hiperdiploide
- Se o índex estiver aumentado a doença em princípio é hiperdiploide
- na LLA o prognóstico dos hipodiploides é pior que o dos hiperdiploides.
CD38
Marcador B e de ativação que pode aparecer em T
HLA-DR/CD45
células são blastos (nao completamente maduros)
Expressão do CD3
é do interior, citoplasma, para a membrana
CD13 e CD33
marcadores mieloides - é comum encontrarem-se em blastos linfoides
- os que houver em maior quantidade serão o tipo de cél que estamos a observar a expressar marcadores da outra
