Seminarteil - Analytik Aminosäuren Flashcards
1
Q
Was sagen Aminosäuresequenzen aus?
A
- Zuordnung zu einere Proteinfamilie
- Berechnung des Extinktionskoeffizienten
- Information über mögliche Evolutionswege
- Wiederholende Sequenzen
- Signalwirkung von Aminosäuresequenzen
- Bindesequenzen für Kofaktoren
- Grundlage zur Erzeugung spezifischer Antikörper
- Herstellung spezifischer DNA-Sonden
2
Q
Analytik von Aminosäuren
A
- Aminosäuresewuenzen enthalten Information über Evolution, Struktur und Funktion von Proteinen
- Mit UV/Vis können wir Konzentrtion unserer Peptide und Proteine bestimmen
- Edman-Abbau verrät Zusammensetzung und Sequenz von Proteinen
- chemische und enzymatische Spaltung von Proteinen gibt Informationen über die Position von Aminosäuren innerhalb einer Kette
- Massenspektrometrie bestimmt Identität von Proteinen in Proteingemischen
3
Q
UV/Vis-Spektrophotometrie
A
- Moleküle/Probe wird mit Licht bestrahlt
- sichtbares Licht und UV-Strahlen
- Valenzelektronen der p- und d-Orbitale werden angeregt
- Absorption
- Intensität des ausgestrahlten Lichts wird gemessen
4
Q
Lambert-Beer-Gesetz
A
E = log I0/I = ε c d
5
Q
Molare Masse
A
1 Da = 1 g/mol
6
Q
Welche Peptidbindung spaltet Trypsin?
A
Peptidindung nach Arginin und Lysin, manchmal Cystein
7
Q
Welche Peptidbindung spaltet BrCN
A
spaltet selektiv C-terminal nach der Aminosäure Methionin
8
Q
Welche Peptidbindungen spaltet Chymotrypsin?
A
Peptidbindungen nach aromatischen Aminosäuren, d.h. Tyrosin, Phenylalanin, Tryptophan
9
Q
Bestimmung der Aminosäuresequenz mittels Edman-Abbau
A
- am N-Terminus beginnendes Degradierungsverfahren
- Schritt: der N-terminale Aminosäurebaustein mit Phenylisothiocyanat (PITC) umgesetzt
- Bildung eines Phenylthiocarbamoylpeptid-Derivats
- Umsetzung mit starker Wasserfreie Säure
- Freisetzung 2-Anilino-thiazolinon-Derivat
- Konverter überführt und durch eine wässrige Säure zum stabileren Phenylthiohydantoin (PHT-Aminosäure)
- chromatographischen Methoden bestimmen AS
- Die um einen Aminosäurerest verkürzte Polypeptidkette wird dann weiteren Abbauzyklen unterworfen
10
Q
Proteinanalyse mittels Massenspektrometrie
A
Aufbau MALDI-TOF (matrix-assistes laser desorption-ionisation - time of flight)
- moleküle werden ionisiert und dann mittels Massenspektrometrie analysiert
- Analyr mittels Laserbeschusses über eine Matrix, in der die Moleküle eingebunden sind
- entstandene Ionen werden im elektrischen Feld beschleunigt m = F/a
- Flugzeit ist dabei abhängig von Masse, Ladungszahl
