Sem5 Flashcards
Quels sont les séquences de bases d’une protéine?
Chaîne de 3 nucleotides diff
Comment appelle t’on les séquence d’amino acide dans une protéine? Cbm y’en a t’il ?
64 codons
Quels sont les deux aminoacides avec seulement un seul code?
ATG-> met
TGG -> Trp
Comment l’ADN devient un ARN?
Grâce à la transcription de l’ARN polymerase
Qu’est ce que l’ARN?
-La matrice pour la synthèse des protéines
L’ARN est un polymère linéaire composé de quoi?
Des nucleotides comme l’ADN
L’ARN forme une double hélice comme l’ADN?
Non car il ne possède qu’un seul brin
L’ARN a un groupe OH?
Vrai
Quels sont les bases de l’ARN
Lesqueles sont purines ou pyrimidine?
Purines: adénine et guanine
Pyrimidine: cytosine et uracil
Quel est le nom du nucleoside de l’Uracil?
Uridine
Qu’ajoute t’on à une base pour qu’elle devienne nucleoside ?
Deoxy-rybose pour ADN
Rybose pour ARN
Quelle processus ressemble à la transcription?
La synthèse de RNA est semblable à celle du DNA
Lors de la synthèse de l’ADN quelle est :
L’enzyme
Direction
Matrice
Nucleotides
Adn polymerase
5’->3’
ADN
dATP, dCTP, dGTP, dTTP
Lors de la synthèse de l’ARN quelle est :
L’enzyme
Direction
Matrice
Nucleotides
ADN polymerase
5’->3’
ADN
ATP CTP GTP UTP
Dans quelle sens va le brin codant de l’ADN?
5’->3’
Dans quel sens va le brin matrice de l’ADN
3’->5’
Dans quelle sens va l’ARN messager?
5’->3’
À quelle position relatives au 5’terminus sont les sites promoteurs de l’ARNmessager ? Pour un procariote
TTGACA -> région -35 -> -35
TATAAT -> pribnow box-> -10
Ou débute l’ARN sur le brin codant de l’ADN?
Environ à +1
Comment l’ARN est traduit en protéine?
Grâce à tRNA comme adaptateur
De quoi un composé un ARN de transfert?
Un site d’attachement de l’aminoacide en 3’
Un site de reconnaissance de la matrice (anticodon)
Comment l’aminoacide est il attaché à l’ARNt?
Le groupe hydroxyde 3’ ou 2’ du ribose est lié à l’aminoacide par une liaison Ester
Comment l’ARN de transfert peut il être chargé avec un aminoacide?
Grâce à l’enzyme aminoacyl-tRNA synthétase
Comment les aminoacides sont connecté sur l’ARN de transfert ?
Le groupe hydroxyle 3 ou 2 du ribose est lié à l’aminoacide par une liaison Ester
Quelles sont les deux sous unités du ribosome?
50 s et 30s
Quel choses permettent la synthèse des protéines?
- RNA
- ribosome
Comment le ribosome sait à quelle position sur l’ARNm il doit commencer la traduction?
Au 1 et signal de départ (AUG-Met) après la séquence shine dalgarno
Quel est le signal d’initiation?
Shine dalgarno
Shine-dalgarno est une région avec plusieurs base purine? Lesquels?
Vrai
AGGAGGU
Comment le ribosome sait-il à quelle position sur le mRNA il doit terminer la traduction?
Grâce aux codons de terminaison
Quels sont les codons de terminaison?
UAA / UAG / UGA
Quel est la raison pour lequel UAA, UAG et UGA sont des codons de terminaison?
Aucun tRNA n’existent pour eux
Que se passe t’il avec le RNA quand la protéine a été synthétisée et que le RNA n’est plus nécessaire?
Comme l’ARN n’ pas de groupe hydroxyde pour apporter de la stabilité, des réactions chimique séparé et dégradé les brins d’ARN grâce au phosphate
Cbm d’aminoacide à l’insuline?
Quel est sa masse atomique en Dalton?
51
5808 Da
À quoi sert l’insuline?
Protéine importante pour la régulation de la concentration en glucose
Pk ne pouvait on pas utilisé l’insuline porcine et bovine chez l’humain?
Contiennent des mutations d’AA -> notre corps les dégrade
Qui est quand a découvert l’insuline?
Banting et Best en 1921
Qui et quand a produit de l’insuline humaine dans des bactéries Escherichia coli? Grâce a quelle technologie?
Genentech en 1978 grâce à la technologie de l’ADN recombinant
Comment faut on l’expression recombinante de l’insuline?
- Isolation du matériel génétique
- Synthèse de l’ADN
- Insertion dans un vecteur
- Transfert dans l’hôte
Qu’est ce qu’on isole et comment isole t’on du matériel génétique?
ADN génomique
ARNm
Comment s’appelle la synthèse de l’ADN qui code pour l’insuline
-cADN
Qu’utilise t’on pour l’insertion comme vecteur?
-plasmide
Quel est le fameux hôte lors du transfert dans l’hôte?
Une bactérie
Qu’est ce que la transcription inverse ?
Lorsque l’enzyme d’un virus se sert des 4 dTP pour passer de l’ARN en ADN complémentaire
Quelle est la fonction de l’ADN polymerase?
Quelle est sa matrice?
Et ses nucleotides?
La duplication de l’ADN
ADN
dATP, dCTP, dGTP, dTTP
Quelle est la fonction de l’ARN polymerase ?
Et sa matrice?
Et ses nucleotides?
La synthèse de l’ARN messager
ADN
ATP CTP GTP UTP
Quelle est la fonction de la transcriptase inverse?
Sa matrice?
Ses nucleotides?
Synthèse de l’ADN
ARN
dATP, dCTP, dGTP, dTTP
Au même titre que l’ADN polymerase et l’ARN polymerase, la transcriptease inverse est également un polymerase?
Oui
Lors de la synthèse de l’ADN du gène d’insuline, le DNA complémentaire est spécifique à ce gène?
Faux cDNA de plusieurs gènes
Lors de la synthèse de l’ADN complémentaire, cbm de copies du gènes de l’insuline peut être fait en 25 cycles?
10^6 copies
Qu’est ce que le plasmide?
Adn circulaire composé d’environ 4000 nucleotides qui peut se répliquer de façon autonome dans la bactérie
Que contient l’ADN genomique?
Tous les gènes de la bactérie
Qu’est ce qui permet au plasmide de se répliquer?
L’origine de réplication
Les mutations de plasmide peut rendre les bactérie résistante aux antibiotiques? Citer exemple
Vrai z.b résistance ampicilline
Comment pourrait on insérer l’ADN de l’insuline dans un plasmide?
Grâce au enzyme de restriction qui sépare le plasmide et rend les extrémités cohésives ou sticky-end
Est ce que les gènes de l’insuline peuvent se liguer dans un plasmide grâce au blunt end du gène de l’insuline?
Non
Comment pourrait on lier le plasmide et le gène de l’insuline?
Introduire des sites de restriction dans le gène de l’insuline par PCR
Après PCR du gène de l’insuline grâce a quoi peut on y créer des sticky end?
Grâce au enzyme de restriction
Comment s’appelle l’insertion d’un gène dans un plasmide?
DNA ligase
Comment peut on injecter le plasmide dans les bactéries?
Pipetter le plasmide, le mettre avec bactérie, chauffer à 42ºc, ajouter nutriment .
Les bactéries se dupliquent avec le plasmide modifié
Toute les bactéries se duplique avec le plasmide modifiés? Si non comment peut on identifier les bactéries qui contiennent le plasmide?
Non, on ajoute de l’ampicilline (antibio) pour que seule les bactéries avec plasmide modifié survivent
Les bactéries sans plasmide expriment une protéines en plus?
Non c’est celle avec plasmide qui contienne la protéine formée et résistante à l’antibio
Comment peut on purifier la protéine recombinante?
Chromatographie
Quelles sont les 3 méthode de chromatographie différente? Par quelle principe de séparation?
Par gel-filtration (taille)
Par échange d’ions (charge)
D’affinité (affinité spécifique)
Comment fonctionne la chromatographie d’affinité ?
Bille avec des groupes chimiques ex glucose
La protéine avec affinité pour le glucose s’y accroche également
Comment fonctionne l’expression de protéines recombinante avec un tag? (Dans chromatographie d’affinité)
Le tag est un gène ajouté devant le gène cible pour la protéine. L’insuline lié au TAG et peut également se lier à une autre parties. Ici le tag = GST se lie avec le glutathione
Quel protéine peut se lier au tripeptide glutathione
La protéine GST
Lors de la purification par chromatographie d’affinité à quoi sert l’enzyme?
Séparer insuline et tag car le GST tag s’accroche au bille de glutathione et le reste fuit
À quelle position relatives au 5’terminus sont les sites promoteurs de l’ARNmessager ? Pour un eukariote?
- GGNCAATCT en -75
- TATAAA en -25
Faire SHEMA séquence de sites de terminaison page 36. Épingle à cheveux
Dans les cellule prokariote la séquence complémentaire est riche en quoi?
Et dans la cellule eukariote?
P: C et G
E: queue poly A (adénulate)
Qu’est ce que le ribosome ?
Les usines de la synthèse des protéines. Ils lisent l’ARN messager pour assembler les acides aminés dans l’ordre spécifier en utilisant l’ARN de transfert comme adaptateur.
On parle d’ARN ribosome que avec 2 sous unité
