Selbststudium Flashcards

Question

Weshalb haben AS-Sequenzen eine bestimmte 3D-Struktur?

Answer 1

- durch die Seitenketten - Torsionswinkel (im Ramachandran-Diagramm dargestellt)

Answer 2

- H-Brücken zwischen benachbarten ß-Strängen - Regelmäßige Knickung der Peptidkette - Seitenketten ragen nach unten / oben - Stabilisierung durch Ile, Val, Tyr - rechtsgängige Verdrillung durch Behinderung der Seitenketten - parallel, anti-parallel & gemischte Faltblätter

Answer 3

- rechtsgängig 3,6 AS/Windungen - Peptidbrücken im Inneren, Seitenketten nach außen - H-Brücken zw. jeder 4. AS - Stabilisierung durch Ala, Met, Glu - Destabilisierung durch Pro & Gly

Answer 4

- Schleifen (Turns): - Kollagen-Tripelhelix - ungeordnete Bereiche

Answer 5

- Elektrostatische WW - Van-der-Waals-WW - Intramolekulare H-Brücken - Hydrophobe WW - Disulfidbrücken

Answer 6

Anordnung mehrerer Polypeptidketten zu einem multimeren Komplex durch Protein-Protein-Interaktion, Disulfidbrücken & Quervernetzung über Schiff-Basen

Answer 7

- kooperative Effekte - allosterische Regulatoren - Posttranslationale Modifikationen

Answer 8

1) Homogenisierung der biologischen Probe (Zelle, Gewebe) 2) Zentrifugation zur Abtrennung der Zelltrümmer 3) Proteine im Pellet werden solubilisiert -> durch Detergenzien 4) weitere Aufreinigungsschritte (Aussalzen, Chromatographie)

Answer 9

1) Zellen werden unter hohen Druck durch eine kleine Öffnung gezwängt 2) Beim Übergang von hohem zu niedrigem Druck platzen Zellen

Answer 10

VORTEILE - effiziente Homogenisierungsmethode - geeignet für MO - einheitliches Homogenat NACHTEILE - geringere Throughput - teuer - Verstopfungsanfällig

Answer 11

- FPLC (mit niedrigerem Druck) - Stationäre Phase z.B. modifizierte Agarose - Elution durch Salzgradienten

Answer 12

- Trennung nach Molekülgröße - Molekularsiebe enthalten poröse Partikel als stationäre Phase - kleinere Moleküle wandern in Poren der Partikel & werden stärker zurückgehalten

Answer 13

1) spezifischer Ligand für das Protein wird an stationäre Phase immobilisiert 2) Nach Bindung an Zielprotein werden die übrigen Proteine durch Waschen abgetrennt 3) Elution durch Zugabe des freien Liganden im Überschuss -> pH Änderung

Answer 14

1) Protein mit His-tag in Zellysat 2) Beladung der äquilibrierten Spinsäule 3) Zentrifugation & Waschschritte 4) Elution der getaggten Proteine mittels His im Überschuss

Answer 15

1) Aufreinigung & Trennung von Biomolekülen 2) poröse stationäre Phase 3) hydrophobe WW mit hydrophoben Seitenketten der Proteinoberflächen 4) hohe Salzkonzentration begünstigt Interaktion mit stationäre Phase

Answer 16

1) antigenbeschichtetes Reaktionsgefäß 2) Waschen -> Antikörper hinzufügen 3) spezifische Antikörper bindet an Antigene 4) enzymgekoppelter Antikörper bindet an antigenspezifischen Antikörper 5) Substrat wird hinzugefügt und vom Enzym in farbiges Produkt umgewandelt

Answer 17

1) mit Antikörpern beschichtetes Reaktionsgefäß 2) Antigene binden an Antikörper 3) ein zweiter Antikörper, der mit einem Enzym gekoppelt ist, bindet an immobilisierten Antigen 4) Substrat wird hinzugefügt und vom Enzym in farbiges Produkt umgewandelt

Answer 18

1) SDS-PAGE mit elektrophoretischen Übertragung der Proteine aus dem Gel auf eine Nitrozellulosefolie oder Nylonfolie 2) Inkubation mit Primäre- & Sekundärantikörper 3) enzymgekoppelte Sekundärantikörper erzeugt ein gefärbtes Produkt

Answer 19

Temperaturanstieg um 10°C -> doppelte Reaktionsgeschwindigkeit Temperaturoptimum bei 40°C

Answer 20

Aktivitätsmaximum zwischen pH 4-9 Ursachen: Konformationsänderung/Denaturierung & reversible Dissoziation/Ionisierung von Enzymgruppen, Substraten, Co-Faktoren