Methoden der Proteinbiochemie

Question 1

Wofür steht SDS-PAGE?

Answer 1

SDS-Polyacrylamidgelektrophorese

Question 2

Erkläre den Ablauf eines SDS-PAGE

Answer 2

1) Natriumdodecylsulfat (SDS) denaturiert die Proteine -> erzeugt negative Überschussladung
2) ß-Mercaptoethanol reduziert Disulfidgruppe des Proteins
3) die Porengröße des Acrylamidgels bestimmt Trennschärfe
4) negativ geladenen SDS-Protein-Komplexe wandern zur Anode (+)
5) Sichtbarmachung der Proteine im Gel mit Coomaissie Blue oder SIlberfärbung

Question 3

Erkläre den Ablauf von isoelektrische Fokussierung?

Answer 3

1) Denaturierung der Proteine durch Zugabe von Harnstoff, ß-Mercaptoethanol & nicht-ionischen Detergenz
2) Gesamtladung des Protein bleibt erhalten
3) Elektrophoretische Trennung mit pH-Gradienten
4) Proteine wandern bis zu ihrem ioselektrischen Punkt

Question 4

Erkläre die 2D-Gelelektrophorese

Answer 4

Aufeinanderfolgende Kombination aus isoelektrischer Fokussierung & SDS-PAGE
-> über 1000 Proteine können getrennt werden

Question 5

Wo wird die Massenspektrometrie eingesetzt?

Answer 5

• Bestimmung der molaren Masse
• Proteinidentifizierung & Proteinquantifizierung
• Identifizierung von posttranslationalen Modifikation

Question 6

Wie funktioniert die Proteinidentifizierung des MS?

Answer 6

1) 2D-Gelelektrophorese
2) Proteolytische Spaltung der Proteine im Gel
3) Auftrennung der Peptidfragmente eines Spots durch HPLC
4) Identifizierung der Peptidfragmente mittels MS

Question 7

Erkläre was Proteomics ist?

Answer 7

Bestimmung des Protein-Expressionsmusters der Probe und posttranslationaler Modifikationen