Proteómica 2.4 Flashcards
recuerda poner como funciona
Cual es la técnica utilizada para la purificación de proteínas, tambien aplicado a metabolómica (asilar metabolitos) *fase liquida.
Cromatografía de Intercambio Iónico
Explica esta técnica de purificación de proteínas
Aplicada a gases o liquidos, se basa en tecnología de intercambio ionico: avienta corriente electrica & registra espectro de absorvancia de la luz, para identificar moléculas pequeñas.
*cromatografo-alcohol.
Tipos de Cromatografía de Intercambio Iónico
- *iones
*exclusión tamaño (identifica proteínas presentes por absorvancia, y las separa por peso molecular) - afinidad (membrana que es afin a ciertas moleculas de interés- carga negativa o positiva )
Se puede acoplada a cromatografia de gases, es para metabolitos que no conocemos.
Espectometría de masas
Etsudiantes quieren identificar biomarcadores tempranos para cancer de colon, lo quieren hacer hacer mdiienco el cnjunto total de metabolitos en una muestra de sangre. ¿cual es la metodología ma sporpiada para identificar los metabolitos?
Espectometría de masas acoplada a cromatografía de gases
Técnica
Usa una reacción antigeno anticuerpo, se acoplan a un cromogeno/sustancia que cambia de color. Sumamante especifica para proteínas particulares como las SPIKE.
Elisa
PCR
Tecnica que utiliza la unión de Anticuerpos monoclonales a Antígenos en placa.
Elisa
*colorimetrico
Permite identificación de proteínas base a su masamolécular finidad por anticuerpos. usa gel de acrilamida.
Western blot
*acrilamida
Se puede acoplada a cromatografia de gases, es para metabolitos que no conocemos.
Espectometría de masas
Tecnica que se basa en afinidad antigeno anticuerpo que permite analizar varias proteínas en paralelo.
Micorareglos
Va a utilizar anticuerpos primarios en una matriz. Determinas a la parla asuencia o presencia de varias proteónas que hibridan a la vez.
Malditof
Con un laser indica diferente coloración dependiendo el metabolito y su espectro de absorvancia.
forma de
espectometria de masas acoplada cromatografo de gases.
Combinación de fase liquida Y fase gaseosa.
la proteínas estan a la misma carga en el campo elétrico. No hay variaciones en carga.
IMG
gráfico M/Z
por Malditof
Tecnicas para validación de otras tecnicas o ausencia y presencia de patogenos
ELISA , WESTERN BLOT; MICROARREGLOS
Caracterización de proteínas
M = masa
Z = carga elétrica
m/z= punto isoelétrico
Técnicas para caracterizar proteínas
Basadas en gel & computacionales
*usas espectometrias para ver que hay “mineria de datos” es proceso mas amplio, si solo quieres un resultado usas las técnicas de caracterización gel mas espeficio (sabes que buscas)
- Electroforesis en gel de poliacrilamida (identifica M)
- Electroforesis el gel bidimencional (2Dpage-en poliacrilamida identifica Z & M)
Basadas en Gel
proteínas mas pesadas hasta arriba
Permite identificar proteínas en base a su carga y masa elétrica basada en gel
2D page
Metodo para conocer la secuencia de aminoacidos de una proteína, los marca & separa de la cadena peptídica con trisina.
Secuenciación edman
Consistia en fragmentar una proteína en 50-60 aminoácidos, a traves de proteasas (tripsina). Se les marcan con diocionalato.
Cuantificación de proteínas en tejidos vivos/estudios dinámicos
usando isotopos radioactivis
ICAT, SILCO, ITRAQ
Marca a la cisteína con diferentes isotopos radioactivos (carbonos).
IMG
carbono diferente a carbono 14
ICAT
cada isotopo da diferentes espectros de absorvancia, presencia a ousencia de proteínas. al analizar con espectometría de masas, relación M/Z.
Fase previa de gel de acrilamida (2D-page), una vez que las proteinas estan identificadas/separadas por m/z. Tomas las proteínas con caracteristicas comunes. Despues Marca a la cisteína con diferentes isotopos radioactivos
SILAC
SILCOuarcANEEEE
ICAT masivo & paralelo
ITRAQ
Nos permite hacer los mismo que ICAT, utilizando diferentes isotopos radioactivos de manera masiva. diferenciar varias muestras.
Técnicas de proteomica estrutural tridimensional
- Cristalografía de rayos X
- Resonancia magnética nuclear
Involucra a las Proteínas en forma cristalina expuestas a un rayo x, por un patron de bifracción de la luz pueden determinar su estructura proteíca.
su estructura tridimencional de proteínas
Cristalografía de rayos X
*la más estudiada.
Base de datos de proteínas
UNiprot
Aplica campo magnetico que hace resonar a los atomos presentes en la molécula, se termina las partes por millon de los atomos y distribución espacial.
su estructura tridimencional de proteínas
Resonancia Magnética Nuclear
