Pendahuluan Flashcards
Tujuan dari Triparental mating
Memasukkan pGWB402-MmCu/Zn-SOD ke dalam Agrobacterium tumefaciens
Bahan yang dibutuhkan untuk Triparental mating
- E. coli DH5a mengandung pGWB402-MMcu/Zn-SOD
- A. tumefaciens strain LB 4404 mengandung disarmed pTi (tidak mengandung T-DNA)
- E. coli DH1 mengandung pRK2013
Setidaknya pada triparental mating harus terdiri dari
Donor strain
Helper strain
Recipient strain
Mengandung plasmid yang dapat dimobilisasi yang diinginkan
Donor strain > E. coli DH5a
Memiliki plasmid konjugatif yang dapat memobilisasi plasmid yang diinginkan ke dalam strain penerima dalam trans
Helper strain > E. coli DH1 pRK 2013 can not replicated
Recipient strain
A. tumefaciens strain LBA 4404
Ceritakan langkah dalam triparental mating
Langkah 1: konjugasi dimulai oleh “helper plasmid” yang dapat memobilisasi diri; helper plasmid ditranskonjugasikan ke dalam strain donor yang mengandung plasmid dengan fungsi yang diinginkan
Langkah 2: Plasmid donor dimobilisasi dalam trans oleh helper, mentransfer plasmid donor yang diinginkan ke dalam sel penerima
Ciri-ciri A. tumefaciens
-Gram negatif
-fitopatogen; mempunyai plasmid pTi
-mentransformasi sel tanaman > tumor
Tumor pada tanaman terjadi sebab
- Adanya transfer, integritas, dan ekspresi gen yang terdapat di daerah T-DNA yang terdapat di plasmid pTi ke dalam genom sel tanaman
- Ekspresi gen tms dan ipt menghasilkan ZPT > tumor
Transformasi genetik tanaman
1. Inokulasi
2. Ko-kultivasi
3. Regenerasi
4. Seleksi sel/jaringan transgenik
Pada tanaman transgenik To ~
- Asetosiringon
- Gelap (A. tumefaciens = soil born)
-+ cefatoxim: membunh bakteri - Sel-jaringan-tunas
- Bertahap (dengan cara konsentrasi antibiotik dinaikkan secara bertahap)
To ~ F1
Analisis tanaman transgenik
1. Analisis integrasi transgen di dalam tunas transgenik dengan …
2. Analisis southern
3. Analisis northern
4. Analisis westhern
5. Analisis stabilitas
6. Aklimatisasi
7. T1~
- PCR
- DNA
- RNA
- Protein
- gen
- selfing
- F2
Analisis T1
1. Analisis stabilitas gen
2. Menggunakan pola pewarisan
3. Perbandingan T1:R
4. Genotipe R
5. R selfing >
- PCR, hibridisasi southern
- Mendel segregasi
- 3:1
- HH dan Hh
- seleksi untuk T2 homozigot
Sterilisasi dan perbanyakan bahan tanaman
- Tembakau (biji dan tanaman in vitro)
- Sodium hipoklorit
- Air steril
- Media tumbuh MSo
Segregasi gen hpt
1. Tembakau transgenik mengandung gen
2. Kepanjangan hpt
3. Resisten terhadap
4. Dipautkan dengan
- SOD-hpt
- higromisin fosfo transferase
- gen hpt
- gen target
- Gen target …, sel … berdasarkan gen target
- Media mengandung
- HItung jumlah biji yang berkecambah:tidak berkecambah
- Tidak dapat dideteksi, tidak dapat diseleksi
- HIgromisin
- Resisten: kecambah hidup , sensitif: kecambah mati
