Manipulación de genes

Question 1

Características de la manipulación genética

Answer 1

• Al azar
• Variantes
• Ectópicas
• Inesperadas
• Patrones de expresión subóptimas

Question 2

Transgen

Answer 2

• Gen ajeno al organismo
• Expresa proteínas que normalmente no expresa

Question 3

Tipo de organismo que se usa para modificar el genoma

Answer 3

Procariotas

Question 4

Microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertilizados
Pasos

Answer 4

1. Identificar al gen de interés
2. Insertar el gen en el vector adecuado
3. Microinyección del DNA dentro del pronucleo de un huevo fertilizado
4. Implantación del huevo en una madre de alquile
5. Permitir el desarrollo del embrion hasta su nacimeinto
6. Demostrar que el gen se incorporo de manera estable
7. Demostrar que el gen se expresa

Question 5

Generación de un raton knock-out

Answer 5

1. Se flanquea al gen de interes con regiones homólogas al genoma a modificar
2. Microinyección del DNA dentro del pronucleo de un huevo fertilizado

Question 6

¿Cuándo se hace la microinyección del DNA dentro del pronucleo de un huevo fertilizado?

Answer 6

Antes de la primera división mitótica para que todos los genes sean iguales

Question 7

¿Cómo se demuestra que el gen se incorporo de manera estable?

Answer 7

Muestra de la cola del ratón

Question 8

¿Cómo se demuestra que el gen se expersa?

Answer 8

Electroforesis

Question 9

Resultado de la microinyección del DNA dentro del pronucleo de un huevo fertilizado

Answer 9

Animales transgénicos
Heterocigoto → Fundador

Question 10

Problemas de la microinyección del DNA dentro del pronucleo de un huevo fertilizado

Answer 10

• Sobreviven pocos
• Gen insertado al azar
• No todas las células reciben el gen
• El gen no se expresa lo suficiente

Question 11

Pasos de las modificaciones genéticas en células madre embriónicas

Answer 11

1. Se obtienen células precursoras de un embrión → Blastocisto (se mantienen en cultivo de factores inhibitorios de la diferenciación)
2. Se transfiere un gen en las células precursoras embrionarias in vitro
3. Se inyectan las células precursoras embrionarias en el blastocisto
4. Se transfiere el blastocisto al ratón del huésped
5. Nace un ratón quimera
6. El ratón quimera se reproduce
7. Si la progenie ha sido alterada genéticamente, los cambios se han incorporado a línea germinal

Question 12

Quimera

Answer 12

50% de un ADN
50% de otro ADN

Question 13

Producto de la cruza de dos quimeras

Answer 13

100% de presencia de un gen en el ADN

Question 14

Clonación

Answer 14

• Núcleo haploide + ovocito sin citoplasma
• Descarga electrica
• Desarrollo in vitro hasta morula
• Implantación
• Clón

Question 15

CRISPR

Answer 15

Clustered regularly-interspaced short palindromic repeats
* Secuencia repetitiva de DNA presente en bacterias, separada por espaciadores (provenientes de virus que han atacado a la bacteria)
* Palindromico → se lee igual de izquierda a derecga
* Molécula de RNA en procariotas

Question 16

Cas

Answer 16

Proteína asociadas a CRISPR

Question 17

Funcionamiento de CRISPR-CAS

Answer 17

1. Pequeños fragmentos de DNA viral se incorporan al genoma bacteriano
2. Se unen interespaciadas a secuencias palindrómicas
3. Transcripción y generación de un pre-crRNA (RNA no codificante)
4. CAS procesa pre-crRNA
5. crRNA maduro
6. Ensamble de proteínas CAS y crRNA

Question 18

Funciones de CRISPR-CAS

Answer 18

Activar transcripción
Disminuir transcripción → KRAB
Desaminación

Question 19

Aplicaciones de CRISPR-Cas

Answer 19

• Terapia celular → Parkinson (SNCA) y Huntington (huntingtina)
• Terapia de células madre → Cardiopatía isquémica (sobreexpresión hemooxigenasa 1 → regeneración)