Análisis de ácidos nucléicos Flashcards

You may prefer our related Brainscape-certified flashcards:
1
Q

Primer paso para los estudios de biología molecular

A

Extracción de DNA

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
2
Q

¿De qué depende el método de extracción?

A
  • Tipo de ácido nucléico
  • Organismo de origen
  • Fuente de origen
  • Técnica a usar
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
3
Q

Extracción de DNA técnica de fenol-cloroformo

A
  1. Lisis y liberación de DNA
    Cloruro de amonio → lisis de eritrocitos
    SDS → Lisis de membranas celulares y nucleares
  2. Extracción de proteínas y lípidos con solventes orgánicos → fenol + cloroformo + alcohol isosalámico → Fase orgánica: lípidos, proteína y debris celulares → Fase acuosa: ácidos nucleicos
  3. Precipitación de DNA: solución salina salturada (desnaturaliza proteínas) y etanol 100% (precipita DNA)
  4. Lavado del boton de DNA → Etanol 70% (2 veces) + agua
  5. Centrifugado
  6. Fase fenólica → buffer Tris (EDTA) → abajo
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
4
Q

¿Por qué es necesario eliminan los eritrocitos durante la extracción de ADN?

A

Interfieren en el análisis de ADN

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
5
Q

Compuesto usado para la lisis de membranas y nucleares

A

Dodecilsulfato sódico
SDS

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
6
Q

Función de buffer

A

Liberar DNA de histonas

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
7
Q

Espectrofotometría

A
  • Solución con moléculas suspendidas permite el paso de luz
  • Mayor absorción de luz → Mayor concetración
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
8
Q

Fluorometria

A
  • Unión específica de colorantes flourescentes ente las dos cadenas del ácido nucléico
  • Absorbe luz con una longitud de onda y emite una superior
  • Hoechst33258
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
9
Q

¿En qué se basa la PCR?

A

En la replicación de una nueva cadena de DNA

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
10
Q

¿De qué requiere una PCR?

A
  • Secuencia de DNA
  • Enzima DNA polimerasa
  • Desoxirribunucleotidos
  • Primers
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
11
Q

Pasos para hacer una PCR

A
  • Extracción DNA
  • Se coloca en un tubo
  • Se agrega → primers, DNA polimerasa, cofactores y nucleotiodos
  • Termociclado
How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
12
Q

Por qué se usa la DNA polimerasa

A

Taq
95º
Polimerisa una cadena de DNA a partir de una preexistente

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
13
Q

Cofactor de la Taqpolimerasa

A

Cloruro de magnesio

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
14
Q

Función de amortiguador

A

pH aducuado 8.4

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
15
Q

Función primers

A

Reconocen secuencias blanco en DNA molde
Transcriben desde 3´
Ricos en GC

How well did you know this?
1
Not at all
2
3
4
5
Perfectly
16
Q

Fases del termociclado

A

Desnaturalización → separación de las cadenas, 95º
Hibridación → aliniación primers en 3´, 50º-60º
Extensión → Taq polimerasa actua sobre primers agregando nucleotidos, cadenas complementarias, 72º
40 ciclos

17
Q

Electroforesis

A
  • Separación de moléculas de distinto peso al ser sometidas a un campo eléctrico.
    Elementos
  • Camara de electroforesis
  • Gel de agarosa → - = poros +
  • Transiluminador ultravioleta
18
Q

qPCR

A

PCR en tiempo real o PCR-TR
* Con cada ciclo se detectan los productos amplificados
* Se usan tinciones o sondas con fluoróforos para detectar fragmentos amplificados
* Cuantificación de la calidad DNA (carga o expresión de genes).

19
Q

Método más sensible para detectar y cuantificar los ácidos nucleicos

A

qPCR

20
Q

Sonda

A

Secuencia de nucleoótidos del gen de interes

21
Q

Sistema reportero flourescencia

A

qPCR
Específico → secuencia complementaria
Sonda flourescente de oligonucleótidos con reportero flourescente
No específico → Se intecala en doble cadena
Moléculas intercalants con afinidad por el dsDNA, genera señal flourescente SYBER Green

22
Q

PCR estándar

A

Cualitativa → presencia o ausencia

23
Q

PCR múltiple

A

Detección cualitativa de distintos genes

24
Q

PCR-RFLP

A

Restrictión fragment lenght polymorphism

25
Q

PCR-RT

A

ARN → cADNA
Detección de virus