Elisa Flashcards
Tipo de respuesta del sistema inmune innato
- Rápida
- Inespecífica
Tipo de respuesta del sistema inmune adaptativo
- Lenta
- Específica
Células del sistema inumen innato
- Barrera epitelial
- Célula dendritica
- Fagocitos
- Mastocitos
- NK
- HCM
Células del sistema inmune adaptativo
Células plasmaticas → LB y LT
Estructura de los anticuerpos
Epitope
Parte de un antígeno que es reconocida por un anticuerpo, el cual se le une
Aplicación de la prueba ELISA
- Identificación, cualtificar y localizar moléculas
- Medición de los componentes de la sangre
- Examinar detalles de un tejido
Diagnósticos mediante ELISA
- Ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
- Interacciones Antigeno-anticuerpo
ELISA directo
- Ag inmovilizado sobre placa
- Ac primario marcado con una enzima que se une al Ag de interés
- Sustrato que reacciona con la enzima → señal visible
Función ELISA directo
- Identificación y cuantificación del antígeno de interés
- Respuesta inmune a determinado antígeno
- Menor sensibilidad
- Mayor ruido de fondo (proteínas y Ag)
ELISA indirecto
- Ag inmovilizado en placa
- Ac primario sin marcar se une a Ag
- Ac secundario marcado con una enzima se une a Ac primario
- Sustrato que reacciona con la enzima → señal visible
Función ELISA indirecto
- Identificación y cuantificación del antígeno de interés
- Determinar concentración total del anticuerpo en una muestra
- Alta sensibilidad
- El procedimiento es muy largo
- Posible reacción cruzada
ELISA tipo sandwich
- Ac de captura inmovilizado
- Se añade muestra con Ag de interés que se une al Ac
- Se añade el Ac de detección que se unira al Ag unido al Ac
- Se añade Ac secundario marcado que se une al anticuerpo de detección
- Se añade sustrato
Función de la ELISA tipo sandwich
Identificación y cuantificación del Ag
Analisis de muestras complejas
Alta sensibilidad y especificidad
Citometría de flujo
Método rápido objetivo y cuantitativo de análisis de células, núcleos, cromosomas, mitocondrias u otras particulas en suspensión.
¿Qué permite que una citometria de flijo sea específica?
El diseño de Ac monoclonales
CD
- Cluster de diferenciación
- Proteína membranal para diferenciar células o linajes celulares espcíficos.
¿Cuántos Ac se pueden colocar en una citometría de flujo?
4-5
Pasos de la citometría de flujo
Células en Buffer de P → se alinean → sistema óptico (láseres y filltros) las iluminan → se reconoce el tamaño, la granularidad y las proteínas que expresan (marcadores)→ señal luminosa se traduce en señales electrónicas.
SEPARA GRUPOS CELULARES
Método usado para cuantificar Linfocitos CD4+ en pacientes con VIH
Citometría de flujo
Marcadores de leucemia mieloide
CD 33, CD 14, CD 15
Marcadores de leucemia linfoide
- T → CD3, TRC
- B → CD79a,CD22
- B1proB → CD79a,CD22,CD19 * BII:CD10
- BIII → preB
- BIVB → sIg
IgM
Respuesta inmune agudo
IgG
Respuesta inmune de memoria
SOUTHERN BLOT
Técnica de laboratorio utilizada para detectar una secuencia específica de ADN (gen) en una muestra de sangre o tejido.
NORTHERN BLOT
Técnica de laboratorio que se utiliza para detectar una secuencia de ARN
específica en un muestra de sangre o de tejido.
WESTERN BLOT
Técnica de laboratorio utilizado para detectar una proteína específica en una muestra de sangre o tejido.
EASTERN BLOT
Proteínas modificadas
Pasos de Southern Blot
Aísla DNA
2. Enzimas de restricción
3. Electroforesis
4. Se desnaturaliza DNA (separación cadenas)
5. Papel filtro de nitrocelulosa (se pega DNA)
6. Hibridación (DNA se expone a sonda con marcador, si se complementa positivo (bandas a la par))
Prueba a realizar para identificar un gen de cáncer en un px
Southern Blot
