DNA recombinante

Question 1

DNA recombinante

Answer 1

Secuencias de DNA derivadas de más de una fuente

Question 2

Enzimas de restricción

Answer 2

• Provienen de bacterias (mecanismo de defensa ante ADN foráneo → lo degradan)
• Función de endonucleasas
• Cortan enlaces fosfodiéster

Question 3

LAMDA

Answer 3

Bacteriofago con DNA → Lo inyecta a bacteria → replicación, transcripción y traducción

Question 4

Nomenclatura de las enzimas de restricción

Answer 4

• Acronimo de 3 letras cursivas → 1.- género, 2.- y 3.- especie
• Letra o número de acuerdo a **cepa o serotipo **
• Número romano (cronología en la que se aislaron)

Question 5

Endonucleasa

Answer 5

• Degrada DNA extraño
• Reconoce una secuencia y corta

Question 6

Enzimas del sistema de modificación

Answer 6

Metilasas → no degradación (en C o A).

Question 7

Componentes de las enzimas de restricción

Answer 7

• Endonucleasas
• Enzimas del sistema de modificación

Question 8

Endonucleasas de restricción I

Answer 8

Corte aleatorio y asimétrico lejos del sitio de reconocimiento

Question 9

Endunucleasas de restricción II

Answer 9

Secuencias palindrómicas
Corte → Sitio de reconocimiento = sitio de corte

Question 10

Endonucleasas de restricción tipo III

Answer 10

Corte asimétrico lejos del sitio de reconocimiento

Question 11

Endonucleasas de restricción tipo IV

Answer 11

Reconoce DNA metilado

Question 12

Corte cohesivo

Answer 12

Corte en diferente posición
Nucleotidos libres
Endonucleasa de restricción tipo II

Question 13

Corte romo

Answer 13

Corte simétrico en ambas cadenas

Question 14

Pasos para generar un DNA recombinante

Answer 14

1.- 2 DNA de distintas fuentes + enzima de restricción
2. Fragmentos complementarios (plasmido)
3. Ligasa
4. DNA recombinate

Question 15

Vector

Answer 15

Molécula dsDNA con capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno

Question 16

Vector de clonación

Answer 16

• ORI → TA
• Sitio múltiple de clonación → Enzimas de restricción para insertar DNA complementario
• Marcador de selección → bacteria con plásmido
• Almacena secuencias
• Obtener grandes cantidades de DNA (cél con mismo DNA)
• Plásmidos, bacteriófagos, fagémidos, cósmidos

Question 17

Vector de expresión

Answer 17

• ORI
• Sitio múltiple de clonación
• Marcador de selección
• Promotor
• IRES
• Sitio de entrada a ribosoma
• Secuencia de poliA
• Producir un transcrito o proteína (info suficiente)
• Plásmidos o bacteriófagos

Question 18

Plásmido

Answer 18

• dsDNA
• Circulares
• Separados del DNA cromosomico
• Bacterias, levaduras
• ORI
• Gen de resistencia antibiotica
• Región de DNA exógeno

Question 19

Bacteriófago

Answer 19

• Virus que infecta bacteria
• Elimina genes que no usa para replicación y empaquetamiento

Question 20

Cósmidos

Answer 20

• Vectores híbridos
• Plásmido ( Gen resistencia + ORI) + Bacteriófago (no proteínas solo empaquetamiento)

Question 21

Fagémidos

Answer 21

• Plásmido al que se le incorpora el origen de replicacion de un fago.
• No tienen sitios cos → líneal

Question 22

Cromosomas artificiales

Answer 22

BAC
YAC
Gen cromosómico + gen → se queda gen de replicación

Question 23

Clonación

Answer 23

1. Preparación del inserto que se va a clonar → Enzimas de restricción
2. Preparación del vector → Enzima de restricción, Desfosforilacion del vector (eliminacion de los grupos fosfatos), Purificación del plásmido
3. Ligación del inserto y el vector → Ligasa
4. Preparación de células competentes → Permeabilidad de la membrana para aceptar el vector Glicerol 10% CaCl2
5. Transformación celular → Adquisición del gen exógeno Nuevo fenotipo a la célula
6. Identificación de las colonias celulares con el vector recombinante