MANIPULACIÓN DE GENES

Question 1

Técnicas utilizadas para modificar el genoma humano

Answer 1

• DNA recombinante
• microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertlizados
• modificaciones genéticas en células madre embriónicas
• CRISPR CAS

Question 2

¿Qué es la microinyección de DNA en pronúcleos en los huevos fertilizados?

Answer 2

• el gen es modificado mediante un plásmido o CRISP-Cas9
• se inyecta gen de interés en un huevo fertilizado de un animal (debe estar en etapa de pronúcleo)
• gen insertado antes de la primera división

Question 3

Características de las modificaciones genéticas en células madre embriónicas

Answer 3

• se obtienen desde los blastocisto
• manipulacion via recombinacion homologa
• reintroducidas en blastocitos receptores
• para asegurar expresión del gen:
  → combinar 2 quimeras → mutación 100% (animal transgénica)

Question 4

Qué se hace en la transferencia de núcleo a una célula somática (clonación)

Answer 4

• se obtiene núcleo de una célula somática
• extracción del citoplasma de un óvulo
• fusión
• implantación (G0/G1)
• clonación del organismo del que fue extraido el núcleo

Question 5

Qué es CRISPR

clustered regularly-interspaced short palindromic repeats

Answer 5

repeticiones palindrómicas cortas agrupadas y regularmente interespaciadas (porque entre ellas está el bacteriófago)

¿Por qué agrupadas? Están en un solo lugar del cromosoma

Question 6

¿Qué es cas?

Answer 6

proteína endonucleasa asociada a la CRISPR

Cas9 → corta

Question 7

CRISPR-Cas

Answer 7

• Bacteriófago inyecta su ADN
• Complejo Cas1-Cas2 corta protoespaciador (identifica PAM en bacteriófago)
• Protoespaciador se añade a la matriz CRISPR (DNA de la bacteria) y se convierte en un espaciador (extremo 5’)
• Polimerasa transcribe región CRISPR → mRNA se une a Cas9
• Se corta DNA y luego hay recombinación no homóloga

PAM solo está presente en DNA bacteriófago

Question 8

Aplicaciones de CRISPR-Cas

Answer 8

permite el diseño de terapias genicas
* distrofia muscular de Duchenne
* atrofia de músculos proximales
* Gen Dmd (proteína distrofina)

Question 9

Cuántas regiones interespaciadoras va a tener CRISPR

Answer 9

depende de cuántos bacteriófagos lleguen para formar esas regiones

Question 10

Función de CRISPR-Cas9

Answer 10

• silenciar, potenciar
• cortar, desaminar, marcar
• insertar nuevo gen

Question 11

Matriz CRISPR

Answer 11

matriz de espaciadores repetidos

Question 12

Protoespaciador

Answer 12

segmento del DNA del bacteriófago