ELISA Flashcards
¿Cómo es el sistema inmune innato?
rápido e inespecífico
¿Cómo es el sistema inmune adaptativo?
lento y específico
Sistema inmune adaptativo (linfocitos B proceso)
reconocimiento del antígeno → activación de linfocitos B por linfocitos T cooperadores u otros estímulos → proliferación → diferenciación → resultado (secreción de anticuerpo/Ig)
Conformación de las Ig
- cadena pesada
- 2 cadenas ligeras
- cadenas unidas por puentes de disulfuro
- región variable (union del antigeno)
- región constante
Linfocito B → célula plasmática → anticuerpos (Ig)
:D
Las pruebas de laboratorio de ELISA asisten al patólogo para:
- identificación de patógenos
- medición de componentes de la sangre
- examinar los detalles microscópicos o la arquitectura de un tejido
¿Qué es el epitope?
regiones del antígeno que puede ser reconocida por un anticuerpo
antigenos tienen diferentes epitopes con diferentes formas
¿Qué es monoclonal y policlonal?
- monoclonal: anticuerpo viene de 1 celula (reconocen 1 epitope)
- policlonales: anticuerpo viene de 2 o más células (reconcen más epitopes)
¿Para qué es la ELISA?
ensayo inmunoabsorbente ligado a enzimas
- reconocer antígeno
- interacción antígeno-anticuerpo
- anticuerpos utilizado: monoclonales
Tipos de ELISA
- directo
- indirecto
- sandwich (directo/indirecto)
ELISA directo
- 1 anticuerpo primario marcado con enzima que reconoce antígeno
- 1 antígeno (inmovilizado en placa)
- proteínas de las muestras y los antígenos se quedan en el fondo
- se cuantifican antígenos
- menor sensibilidad
ELISA indirecto
- 2 anticuerpos (primario y secundario “marcado con enzima para unirse al primario”)
- 1 antigeno (inmobilizado en una placa)
- se cuantifican antígenos y concentracion del anticuerpo en muestra
- procedimiento largo
- posible reacción cruzada
- alta sensibilidad
el que hicimos en lab
ELISA sandwich directo
- 2 anticuerpos (anticuerpo y anticuerpo primario)
- 1 antigeno
ELISA sándwich indirecto
- 3 anticuerpos (de captura, de detección, secundario)
- 1 antigeno
- análisis de muestras complejas
- alta sensibilidad y especificidad
- Ac de captura se inmobiliza en placa
- Ac de captura + Ag
- Ac de deteccion se une al Ag y su Ac de captura
- Ac secundario se une al de detección
- se cuantifican Ag
¿Qué es la citometría de flujo?
- se ven poblaciones, propiedades y etapa de diferenciación celular
- método rápido y cuantitativo
- células en medio líquido (buffer de fosfatos)
- como en fila india
Técnica de análisis que permite identificar a diferentes poblaciones celulares simultanemente
citometría de flujo
Para la citometría de flujo, en qué medio necesitan estar las células
medio líquido (buffer de fosfatos) con el que son alineadas en fila india
¿En qué se traduce la señal luminosa de la citrometría de flujo?
en señales electricas
¿Qué son los clúster de diferenciacion?
- proteinas en la superficie celular
- cada CD es especifica para una célula o linaje celular
- mientra se diferencian van perdiendo y ganando CD’s
CD34 → CD4 y CD8
¿Qué identifica el láser de la citrometría de flujo?
es el sistema óptico que ilumina las células
- tamaño
- complejidad
- granularidad
- proteínas que expresan (marcadores)
- detecta cuántos anticuerpos se pegaron
¿Qué hace FISH?
- identifica ADN
- se puede ver en el microscopio
- se ve con técnica de fluorocromo
ej. gen filadelfia (leucemia)
Tipos de blots
- southern blot
- northern blot
- western blot
son cualitativos
¿Qué hace el southern blot?
distingue secuencias de ADN (pedazos específicos) de sangre o tejido
¿Qué hace el northern blot?
identifica secuencia de ARN específica de sangre o tejido
¿Qué hace el western blot?
identifica proteínas específicas en sangre o tejido
Pasos para el southern blot
- extraemos ADN
- cortamos con enzimas de restriccion
- electroforesis
- desnaturalizamos ADN (separacion de cadenas)
- papel filtro de nitrocelulosa encima de agarosa
- se le agrega carga (peso) para que se pegue ADN al papel de nit.
- hibridamos (se pone sonda en el papel de nitrocelulosa para ver si se complementa)
- se revela
