ADN y PCR 1.2

Question 1

¿Qué es la electroforesis?

Answer 1

• separa biomoléculas dependiendo de su peso molecular
• biomoléculas están en un campo eléctrico
• dura 30 min

Question 2

Elementos necesarios para una electroforesis

Answer 2

• cámara de electroforesis
• gel de agarosa
  → + concentada = poros + pequeños
  → - concentrada = poros + grandes
• marcador de peso molecular
• transiluminador violeta

Question 3

Características de la cámara de electroforesis

Answer 3

• genera campo eléctrico alrededor del gel
• tiene 2 polos conectados a 1 fuente de energía

Question 4

Características del gel de agarosa

Answer 4

• polisacárido extraído de algas marinas
• separa fragmentos de DNA que van de 100 pb a 25 kb
• concentración de agarosa = tamaño del ácido nucleico analizado

Question 5

¿Para qué sirve el peso molecular?

Answer 5

saber cuántos pares de bases tiene la banda en la electroforesis (por ej. 150)
→ pares de bases pintados en la cámara tienen que coincidir con el gen que buscamos

Question 6

¿Qué es el marcador de peso molecular?

Answer 6

• mezcla de moléculas de ADN o proteínas
• permiten comparar el tamaño de moléculas (ac. nucleicos/proteínas) en las muestras de electroforesis

Question 7

Tipo de PCR (estándar/punto final)

Answer 7

• si/no (cualitativa de un segmento de ADN)
• mediantes geles de agarosa
• amplificación de ADN con 2 partidores

Question 8

Tipo de PCR (múltiplex)

Answer 8

• busca diferentes (2 o más) genes (ADN) en 1 muestra (cualitativa)
• se utilizan varios partidores

Question 9

Tipo de PCR (SSO)

secuence specific oligo

Answer 9

• busca compatibilidad en transplantes
• usa secuencias específicas de polinucleótidos
• es la + común
• busca polimorfismos en HLAI y HLAII

Question 10

Tipo de PCR (SSP)

Answer 10

• busca secuencias específicas
• detecta polimorfismos

Question 11

Tipo de PCR (RFLP)

restriction fragment length polymorphisms

Answer 11

• primero se crean fragmentos con enzimas de restriccion (cortar ADN) y después se hace PCR (cualitativa)
• se detectan polimorfismos genéticos en ADN

Question 12

Tipo de PCR (TR)

transcriptasa reversa

Answer 12

• con transcrpitasa reversa para buscar ARN’s (virus)
• síntesis de cADN a partir de ARN

Question 13

Tipo de PCR (RT)

real time

Answer 13

• (carga) cuántos virus o bacterias hay de un solo tipo y su detección cualitativa
• se usan tinciones o sondas con fluoróforos
• de tipo multiplex
• es la única que es cuantitativa

es el método + sensible (se usaba en COVID)

Question 14

¿Qué son los microarreglos?

Answer 14

expresión de muchos genes a la vez en muy poco tiempo

px con una enfermedad ver a qué pocitos se adhieren sus genes y su tx

Question 15

¿PCR o Southern blot?

Answer 15

• PCR + sencilla/espacios específicos/cuando hay poco ADN
• Para el southern tiene que haber mucho ADN

Question 16

Tipos de colorantes en el análisis de ácidos nucleicos

Answer 16

• específicos
• no específicos (syber green)

Question 17

Tipo de colorante no específico (syber green)

Answer 17

• cuando hay doble cadena de ADN
• generan señal fluorescente
• tienen afinidad por sdADN
• no nos muestra lo que queremos

Question 18

De dónde a dónde van los primers reverse y forward

Answer 18

forward: 5’ 3’
reverse: 3’ 5’

Question 19

Tipo de colorante específico

Answer 19

• son sondas fluorescentes
• cuando la ADN polimerasa pone nucleótidos se libera fluoróforo y empieza a brillar
• es el más caro y trabajoso

Question 20

¿Qué es una sonda?

Answer 20

secuencia de nucleotidos del gen de interés

Question 21

¿Qué tienen las sondas en sus extremos?

Answer 21

• inhibidor
• fluoróforo