ADN RECOMBINANTE 1.2

Question 1

Tipo I de corte de enzimas de restricción (endonucleasas)

Answer 1

• asimétrico (sitio de reconocimiento y corte son diferentes)
• sitio de corte es aleatorio (rio arriba o abajo)
• corta 1000 pb

Question 2

Tipo III de enzimas de restricción (endonucleasas)

Answer 2

• corte asimétrico
• corte lejos de la secuencia de reconocimiento (20-30 pb)

Question 3

Tipo II de corte de enzimas de restricción (endonucleasas)

Answer 3

• corta secuencias palindrómicas
• sitio de reconocimiento es igual al sitio de corte

es el que usamos el lab

Question 4

Tipo IV de enzimas de restricción (endonucleasas)

Answer 4

reconoce ADN metilado

Question 5

¿Qué son secuencias palindrómicas?

Answer 5

secuencias que se leen igual de derecha a izquierda y viceversa

Question 6

Tipos de corte palindrómico

Answer 6

• romo (simétrico en ambas cadenas, no tiene pares de bases libres)
• asimétrico/cohesivo (tiene pares de bases libres)

preferimos el corte asimetrico/cohesivo

Question 7

¿Por qué es mejor un corte palindromico asimetrico/cohesivo y no un romo?

Answer 7

para que el ADN se pueda recombinar (ADN eucariota - plásmido)

Question 8

¿Cómo son los fragmentos generados por la enzima de restriccion en corte asimetrico/cohesivo?

Answer 8

complementarios

con las otras pb

Question 9

¿Quién va a unir los pedazos libres entre el ADN eucariota y plásmido?

Answer 9

ligasa

Question 10

¿Cómo es el tipo de vector por clonación?

Answer 10

se replica el plásmido muchas veces obteniendo cantidades grandes de ADN de este

Question 11

V/F ¿Se tiene que usar la misma enzima de restricción para el ADN eucariota como para el plásmido?

EcoRI tipo II

Answer 11

verdadero

Question 12

Molécula dsDNA con capacidad de albergar un fragmento de DNA exógeno

Answer 12

vector (plásmido)

Question 13

Tipos de vectores

Answer 13

• clonación
• expresión

Question 14

¿Cómo es el tipo de vector por expresión?

Answer 14

tiene la info suficiente para producir la proteína del plásmido

Question 15

Tipos de vectores que pueden hacer clonación

Answer 15

• plásmidos
• bacteriófagos
• fagémidos
• cósmidos

Question 16

Tipos de vectores que pueden hacer expresión

Answer 16

• plásmidos
• bacteriófagos

Question 17

¿Qué tiene que tener el plásmido (vector) para que inicie la clonación?

Answer 17

• punto de origen
• sitio múltiple de clonación (muchas secuencias palindromicas para que se inserte el ADN eucariota “complementario”)
• marcador de selección (colorante o resistencia a antibioticos)

Question 18

¿Qué tiene que tener el plásmido (vector) para que inicie la expresión?

Answer 18

• origen de replicación
• sitio múltiple de clonación
• marcador de selección
• promotor (inicio de transcripción)
• IRES (sitio de entrada a ribosoma) que es un análogo de la “caperusa”
• cola poli A

Question 19

¿Cómo son los tipos de vectores plásmidos?

Answer 19

• dsADN
• circulares
• separados del ADN cromosomico
• bacterias, levaduras

Question 20

¿Cómo son los tipos de vectores bacteriófagos?

Answer 20

• virus que infectan bacterias
• se modifica genéticamente (eliminan genes que no se requieren para “clonarse”)

Question 21

¿Cómo son los tipos de vectores cósmidos?

Answer 21

• vectores híbridos (plasmido/bacteriofago)
• plasmido da los sitios Ori pero los sitios Cos (extremos) son los que ayudan a que entre el bacteriófago

Question 22

¿Qué son los sitios Cos?

Answer 22

partes del bacteriófago

Question 23

¿Cómo es el tipo de vector fagémidos?

Answer 23

• no tiene sitios Cos
• se queda lineal y se busca un bacteriofago que entre de esta forma

Question 24

¿Cómo son los tipos de vectores de cromosomas artificiales (BAC y YAC)?

Answer 24

• BAC (bacterias) - procariota
• YAC (levaduras) - eucariota

ADN muy grandes

Question 25

V/F ¿Los plásmidos tienen sitios Ori y los bacteriófagos tienen sitios Cos?

Answer 25

verdadero

Question 26

Pasos para el vector por clonación

Answer 26

1. preparación del inserto que se va a clonar (enzimas de restricción)
2. preparación del vector (enzima, desfosforilación y purificación)
3. ligasa (inserto - vector)
4. preparación de células competentes
5. transformación celular
6. identificación de las colonias celulares con el vector recombinante