Lezione 14 (da completare con fattori di virulenza da Lihnde!

Question 1

Che si intende per disbiosi batterica?

Question 2

Cosa significa Virulenza?

Question 3

Quali specie batteriche parodontopatogene hanno dimostrato di possedere dei ceppi estremamente virulenti?

Answer 3

A. Actinomycetemcomitans (ceppo JP2)

P. Gingivalis

Question 4

Che colorante colora maggiormente i Gram -?

Answer 4

La fucsina.
I Gram - che ricevono il cristalvioletto e vengono lavati con alcol, lo perdono quasi del tutto in quanto esso ha affinità per la mureina che è poco rappresentata nei Gram -.

Question 5

Da quali batteri è composta la placca sottogengivale in condizioni di salute?

Answer 5

Anaerobi facoltativi 75% divisi tra cocchi (streptococchi) e bastoncelli (actynomices). Sono tutti Gram +.

Anaerobi obbligati (25%) divisi tra:

a. Gram +. Ritroviamo cocchi (streptococchi e peptostreptococchi) e bastonclli (eubacterium e proprionibacterium).
b. Gram - (FUSOBACTERIUM NUCLEATUM).

Question 6

Da quali batteri è composta la placca sottogengivale in condizioni di gengivite (PI = 2/3)?

Answer 6

Gram + 56%
Gram - 44%
Quindi aumenta la quota di Gram -.

Anaerobi facoltativi 60%.
a. Gram +
b- Gram - (!!!). Neisseria e Eikenella. (Prima non c’erano g- anaerobi facoltativi).
Anaerobi obbligati 40%.
a. Gram -. Compare Prevotella Intermedia.
b- Gram +. Compaiono A. Israeli e A. odontolyticus.
Quindi aumenta la quota di anaerobi obbligati.

Question 7

Quale è la composizione della placca sottogengivale in condizioni di parodontite?

Answer 7

Anaerobi obbligati (90%):

a. G- bastoncelli (P. Gingivalis, P. Intermedia, B. Forsythum)
b. G- bastoncelli mobili e spirochete (T. denticula, T. Vincentii, T Sokranskii)
c. G+

Anaerobi facoltativi (10%):

a. G+ cocchi (da colonizzazione iniziale)
b. G+ bastoncelli (da colonizzazione iniziale)
c. G- (E. Corrodens)

i G- totali sono il 75%
i G+ totali sono il 25%

Question 8

Come si caratterizza dal punto di vista microbiologico la gengivite e parodontite ulcero-necrotizzante?

Answer 8

Sia nella gengivite che nella parodontite ulcero-necrotizzante troviamo una prevalenza di anerobi obbligati G- di cui prevalgono i generi TREPONEMA e SAELOMONAS.

Question 9

Come si effettua un prelievo di placca sottogengivale? Con quali tecniche si analizza?

Answer 9

1. Isolare il dente con tamponcini di cotone.
2. Rimuovere la placca sopra-gengivale con strumentazione sterile.
3. Asciugare dalla saliva
4. Effettuare prelievo con con di carta sterili numero 15 o 20.
5. Inserirli in provetta Eppendorf
6. Lasciarli per 24-48h in frigo prima dell’analisi.

Può essere:

1. Prelievo di singolo sito, per motivi di ricerca o perché resistente a terapia.
2. Prelievo di 1 sito per arcata, si prende il sito più grave.

PCR
Ibridazione DNA-DNA

Question 10

Qual è il funzionamento della PCR real time?

Answer 10

Reazione a catena della polimerasi.

Valutazione qualitativa.

Utilizzo intercalari fluorescenti la cui fluorescenza è valutata dopo ogni ciclo.

20 - 25 cicli

Primer batterio specifico. (nello specifico molte volte si usa la sequenza di DNA che codifica per l’rRNA (RNA ribosomiale) 16S , che fa parte della sub-unità 30s. Questo rRNA è ipervariabile e specie-specifico

Fasi:

1. Denaturazione
2. Allineamento
3. Allungamento
4. Termine ciclo

Question 11

Qual è il funzionamento dell’ibridazione DNA DNA-

Answer 11

Viene anche chiamata CHECKBOARD. (a scacchiera).

In un esame si possono analizzare fino a 45 campioni di placca per 15 specie batteriche differenti.
Il meccanismo di funzionamento è a sonde fluorescenti

Question 12

Da cosa è influenzata la patogenecità di un batterio?

Answer 12

1. fattori di virulenza del batterio

2. Capacità del batterio di modificare la risposta dell’ospite.

Question 13

Quali sono i fattori di virulenza che posseggono i batteri che intaccare l’ospite?

Answer 13

1. Invasività, intesa come capacità di endocitosi.
2. Enzimi che digeriscono proteine e polisaccaridi, così da fornire substrato energetico per i batteri stessi.
3. LPS, che stimola la risposta infiammatoria ed immunitaria dell’ospite.
4. Batteriocine, sostanze prodotte dal batterio parodontopatogeno con attività batteriostatica e battericida nei confronti di altri batteri.

Question 14

Quali fattori di virulenza possiede l’A. Actynomicetemcomitans?

Answer 14

1. PLS
2. Leucotossina
3. Pili e Fimbrie
4. Peptidasi
5. Citotossine (inibiscono replicazione fibroblasti)
6. Collagenasi
7. Fattori immunosppressivi

Question 15

Quali sono i fattori di virulenza del P.Gingivalis?

Answer 15

1. Gingipaine
2. Fimbrie
3. Capsula polisaccaridica

Question 16

Come agisce la LEUCOTOSSINA? A cosa si lega? Che tipo di tossina è?

Answer 16

Esotossina = proteica.
Si lega al recettore della BETA 2 INTEGRINA
Crea pori sulla membrana di MACROFAGI e PMN.

Question 17

Quali sono coinvolti nella produzione e nel funzionamento della LEUCOTOSSINA?

Answer 17

C’è un OPERONE che se ne occupa. Esso contiene 4 geni:

1. ltx A (codifica per la leucotossina in forma inattiva, detta anche pro-tossina)
2. ltx B (secrezione tossina attiva)
3. ltx C (attivazione della pro-tossina)
4. ltx D (secrezione tossina attiva)

Question 18

Quale ceppo di A. Actinomycetemcomitans è più virulento? Quali sono le ragioni biologiche alla base di ciò?

Answer 18

Il ceppo J2P.

Questo ha 2 promotori (invece che 1) per l’operone che produce la LEUCOTOSSINA, che da questo ceppo viene prodotta anche in concentrazioni 10/20 volte maggiori.

Question 19

In quali quadri clinici ritroviamo alte concentrazioni di A. aggr…? Quando no lo troviamo?

Answer 19

Lo troviamo nelle lesioni attive e sopratutto in quelle refrattarie.
Non lo troviamo nelle gengive sane.

Question 20

Che modello di invasione ha il P.Gingivalis?

Answer 20

Modello di tipo 2.

Question 21

Cosa è la fimbrillina? Da chi è prodotta? Da cosa è regolata la sua produzione?

Answer 21

Monomero che va a formare le fimbrie del P. Gingivalis.
Codificata a partire dal gene “fim A”.
La sua massima produzione si ha a 34 gradi centigradi (pari alla temperatura di un sito sano).

Question 22

A che temperatura media si trova un sito malato?

Answer 22

39 gradi centigradi

Question 23

Azione delle fimbrie sulla risposta immunitaria

Answer 23

Inducono iper-espressione citochine da parte di FIBROBLASTI e MACROFAGI

Question 24

Cosa sono le gingipaine? Che tipi di gingipaine esistono? Che funzione svolgono? Da chi sono prodotte?

Answer 24

Da P. Gingivalis.
Sono endopeptidasi.
Esistono:
1. Arg-gingipaine (Rgp)
2. Lys-gingipaine (Kgp)
Funzioni:
1. Degrada proteine per ottenere nutrienti
2. Permette l’invasione del tessuto
3. Distrugge le IgG di classe 1 e 3
4. Distrugge Il1b, Il2, Il6, TNF alfa e Il8

Question 25

Quali sono le funzioni dell’LPS sull’ospite?

Answer 25

1. Induce macrofagi a liberare IL1 e Il17 (pro-infiammatori)
2. Attivazione osteoclasti
3. Induce endoteliociti a liberare chemochine (Il8)
4. Induce endoteliociti a liberare E-selettine (che riconoscono e legano carboidrati presenti sui leucociti in circolo per richiamarli).