Les Principales Méthodes D'études des Protéines Flashcards
Quelles sont les différentes vitesse dans la méthode du centrifugation différentielle et qu’est ce qu’on obtient?
Contient deux partie: le surnageant et le culot
Début : Homogénat cellulaire
–Centrifugation basse vitesse (1000 xg, 10 min)
Le culot contient cellules entières, noyau et cytosquelette
–Centrifugation moyenne vitesse (20 000 xg, 20 min)
Le culot contient mitochondries, lysosomes et peroxysomes
–Centrifugation haute vitesse (80 000 xg, 1h)
Le culot contient microsomes, petites vésicules, RER
–Centrifugation très haute vitesse (150 000 xg, 3h)
Le culot contient ribosomes, virus, macromolécules de grande taille
Le surnageant contient le cytosol
Qu’est ce que la centrifugation en gradient de densité?
Méthode de séparation dans laquelle les substances sont concentrées dans des solutions de sels de césium, de sucrose, de saccharose. Il intervient dans le fractionnement des particules en fonction de leur densité.
Les plus dense vont le plus bas
En terme de densité:
Peroxysomes > Mitochondries > Lysosomes
Quelles sont les caractéristique des chromatographies de partage?
liquide/liquide
Liquide fixé sur un support inerte (papier, silice…)
Principe : Distribution des composants du mélange a séparer dans les deux phases liquides selon leur coefficient de partage
En phase normale : Les molécules hydrophiles sont retenues donc permet de séparer les composés polaires
En phase inverse : Les molécules hydrophobes sont retenues donc permet de séparer les composés apolaires
Quelles sont les caractéristique des chromatographies d’adsorption?
solide/liquide
Adsorbent solide polaire
Principe : Formation de liaisons spécifiques entre les composants et la surface absorbante
Quelles sont les caractéristique des chromatographies d’adsorption (phase inverse)?
solide/liquide
Molécules hydrophobes greffées sur de la silice
Principe : Interactions hydrophobes et élution en jouant sur la polarité de la phase mobile
Quelles sont les caractéristique des chromatographies d’échange d’ions?
solide/liquide
Résine (polymeres d’oses) porteuse de groupements chargés négativement ou positivement
Principe : Interaction électrostatiques avec les composants de charge opposée (resine cationique echange des anions et résine anionique echange cations)
Quelles sont les caractéristique des chromatographies d’exclusion?
phase stationnaire solide/ phase mobile liquide
Autre nom: diffusion / filtration sur gel!!!!
Solide poreux
Principe : Les composants de diamètre supérieur a celui des billes du support sont “exclus” et ceux de diamètre inférieur y diffusent et sont freinés
Quelles sont les caractéristique des chromatographies d’affinité?
solide/liquide
Support sur lequel est greffée une molécule (le ligand) spécifiquement reconnue par un des composants de l’échantillon à analyser
Principe : Rétention et élution par déplacement de l’équilibre de liaison [molecules-ligand greffé]
-séparation des constituants en fonction de leur affinité avec le ligand fixé à la matrice
Quelles sont les principes importants à connaître pour un chromatographies?
- Plus une protéine possède de groupement polaires, plus elles est soluble dans l’eau
- Plus elle possède de groupements apolaires, plus elle est soluble dans les solvants organiques
- Les protéines sortent dans l’ordre inverse de leur affinité pour la résine (matrice). Si les proteines ont une tres forte affinite pour la résine, on aura du mal a les “decrocher” du support solide alors que celles ayant une faible affinité sortiront plus rapidement
Quelles sont le caractéristiques de l’électrophorèse?
haut : maillage large
bas : maillage serré
toujours de - vers +
Type de detergent :
- β-mercaptoéthanol : coupe les ponts disulfure covalents (aussi appelé condition reductrices)
- SDS : sodium dodécyl sulfate : charge toute protéines négativement comme ca le tri ce fait qu’en fonction du poids (+gros vers le haut, -gros vers le bas) (aussi appelé détergents ou condition dénaturante)
Quelles sont les 5 étapes de purification?
1 : homogenat cellulaire
2 : après ultracentrifugation
3 : après chromatographie échangeuse d’ions
4 : après chromatographie par filtration sur gel
5 : après chromatographie d’affinité
Qu’est ce que la Spectro de Masse (MS)?
Les ions vont être dévié par un champ magnétique
Les plus lourds vont être moins dévié que les moins lourds (logique!!!)
Qu’est ce que Maldi-Tof?
Pour les échantillons fragiles, au lieu de bombarder directement l’échantillon initial, on le fixe sur une matrice qui va subir l’action d’une source laser => désorption de la matrice, qui en se “décollant” entraîne des ions, puis ionation
Qu’est ce que la spectroscopie RMN (résonance magnétique nucléaire)
Les protons d’une molécule ont des fréquences de résonance différentes en fonction de leurs atomes voisins.
L’analyse des différentes fréquences de résonnance permettra de déduire la structure de la molécule étudiée
Comment marche l’électrophorèse bidimensionnelle?
Il y a deux critères, le poids et le pH
Les protéines vont bouger en fonction du poids et en fonction du pH
