Koncentrationsbestämning av P-glukos Flashcards
Vad är bakgrunden till koncentrationsbestämning av glukos?
Glukos förekommer i två stycken former, rak aldehydform och ringsluten glukopyranosform. Formerna förekommer i jämvikt i vattenlösning. Glukopyranosform är den vanligaste förekommande formen vid fysiologiskt pH. Aldehydformen kan lätt oxideras till motsvarande karboxylsyra och jämvikten mellan de två formerna förskjuts då mot aldehyd formen vilket gör att all glukos i provet kommer att oxideras- Glukos är den viktigaste energikällan för hjärnan. Glukos lagras och energi frisätts från glykogen och fett under stark kontroll av hormoner.
Vad är analysprincipen för p-glukos? Beskriv även reaktioner.
Glukoskoncentration bestämms av två enzymatiska reaktioner som katalyseras av glukosoxidas (GOD) och peroxidas (POD). En färgad produkt (kinonimin) kommer mätas spektrofotometriskt på 500 nm och en linjär kalibreringskurva kommer utformas.
Kemisk reaktion
Glukosoxidas (GOD) katalyserar oxidationen av glukos till glukonsyra och väteperoxid.
Vid tillsatts av peroxidas (POD), PAP som är en elektronacceptor och HBA kommer en färgad produkt bildas som heter kinonimin som kan mätas spektrofotometriskt
Vad innehåller glukosreagenset?
- Fosfatbuffert
- PAP
- HBA
- Glukosoxidas (GOD)
- Peroxidas (POD)
Bered en PCA lösning med volymen 50 ml.
Innehåll: Perklorsyra 0,33 mol/L i Glycinbuffert 0,25 mol/L med ett pH på 2,7.
Perklorsyra
Densitet: 1670 g/L (på flaskan står de oftast i kg/L men ska va g/L)
Molvikt: 100,5
Procent: 70 %
Glycin
Koncentration 0,25 mol/L
Molvikt: 75,1
Bered 3 olika kalibratorer från kalibrator 50 mmol. Välj själv ut lämplig kakalibratorer för analysen och volym 25 ml.
Gå igenom labbens steg :)
:)
Vad gör PCA-lösningen?
PCA lösningen skapar en proteinfällning
Vart återfinns dem utfällda proteinerna efter centrifugering? I supernatanten eller sedimentet?
Sedimentet på botten
Vad gör glukosreagenset?
Att den färgade produkent kinonimi bildas
Vad kallas reaktionen som sker när dina provrör i glukoslabben får inkubera i värmeskåp under minst 20 minuter?
Vad innebär denna reaktion
Ändpunktsreaktion.
Innebörd: Glukos kan förekomma i två former, rak aldehydform och ringsluten glukopyranosform.
Formerna förekommer i jämvikt i vattenlösning. Den senare är vanligast förekommande vid fysiologiskt pH.
Aldehydformen kan lätt oxideras till motsvarande karboxylsyra.
Jämvikten mellan de två formerna förskjuts då mot aldehydformen, vilket gör att all glukos som finns i provet kommer att oxideras.
Hur bearbetar du dina mätresultat?
- Tabell över prov och värden skapas
- Konstruerar en kalibreringskurva som visar absorbansen (y-axel) som en funktion av koncentrationen (x-axel)
- Ur diagrammet bestämmer jag glukoskoncentration för DK på respektive prov med hjälp av dess absorbans
- Kontrollerar att DK ligger inom godkänt intervall.
- Patientprovernas glukoskoncentration kontrolleras med hjälp av dess absorbans i diagrammet och jämför de med godkänt referensintervall.
Se bild exempel från labbrapporten
Vad är spektrofotometri? Vad baseras absorbans på? Hur är analysen möjlig?
- Kyvett med lösning bestrålas med ultraviolett ljus
- absorbans fås (baseras på hur mycket ljus som absorberats av vår lösning)
- Spektrofotometern har en monokromator som kan ställas in på olika våglängder beroende på ämne och absorberingsförmåga varvid oönskade våglängder filtreras bort.
Vad kan störa analysen?
Hemolys
Vad kan hända om provet får vänta på analys för länge?
Vi kan få ett felaktigt värde.
Varför tillsätts antikoagulantia och glykolyshämmare i provet?
Glykolys hämmare: glukosen bryts ej ner. Hade vi ej haft detta så hade vi fått falskt värde.
Antikoagulantia: för att provet ej ska koagulera för då kan vi ej centrifugera.
Varför används duplikat i denna analys?
För att få ett medelvärde av proven
Varför används kalibratorer?
Dessa har känd koncentration vilket gör att vi kan skapa en kalibreringskurva vi kan använda som referens när vi ska ta reda på okända provers koncentration
Varför används driftskontroller? När får du ej lämna ut svar till beställande läkare?
För att fånga in analytiska fel och visa på medtodens precision och riktigthet. Svar får inte lämans ut om dk inte återfinns inom godkänt intervall
Du ska späda glukosreagenset i 1:2 i fosfatbuffert. Den ska ha ett pH på 7,2. Du behöver 1000 µl till samtliga rör (12 st)= 12 000 µl (12 ml).
Hur gör du?
Hur kalibrerar du en pH-meter?
- Du behöver lösningar med pH 4, 7 och 10
- Elektroden behöver alltid va blöt så den ej torkar.
- Elektroden ska alltid rengöras innan den förs ner i lösning.
- pH meter ska stå på cal
- skölj elektrod och för först ner den i pH 7 och tryck på enter
- Upprepa detta för pH 4
- Upprepa detta för pH 10
Hur ställer du in en spektrofotometer?
Varför ska du hälla i perklorsyran efter glycinet?
SIV regeln
Varför ska du handskas med perklorsyran i dragskåpet?
Den är frätande
Ska du märka din PCA buffert med något faropiktogram?
JA, frätande symbol
Varför fäller vi ut proteiner i analysen?
Dem är inte intressanta
