Immunohistochimie - Dr Patrice Desmeules

Question 1

Quelles sont les sept étapes d’implantation d’une nouvelle étude immunohistochimique? (7)

Answer 1

1. Évaluation des besoins du nouveau test
2. Mise en place d’une feuille de travail (plan)
3. Sélection d’un clone/anticorps
4. Choix des tissus pour l’optimisation du test
5. Validation
6. Implémentation du test
7. Suivi de la perfomance

Question 2

Quelles sont les étapes techniques pour la production d’une immunohistichimie

Answer 2

• Déparafinage
• Hydratation
• Révélation antigénique
• Dilutions

Question 3

Quels paramètres guident la validation d’une nouvelle immunohistochimie? (3)

Answer 3

1. L’objectif visé (diagnostic vs pronostic/predictif)
2. Le type de spécimen (tissus vs cytologie)
3. Les conditions spécifiques (ex. fixateur)

Question 4

Quelles sont les classes d’études immunohistochimiques

Answer 4

1. Diagnostic (classe 1) ex. TTF1
2. Pronostic (classe 2) ex. Ki-67
3. Prédictif (classe 2) ex. PD-L1

Question 5

Quels sont les paramètres qui entrent en compte dans les choix des anticorps

Answer 5

1. Revue de la littérature
2. Contrats de réactifs avec certaines plateformes
3. Données des épreuves de compétence
4. Monoclonal vs Polyclonal
5. Statut réglémentaire
6. Données de laboratoires voisins de confiance

Question 6

Qu’est-ce qu’un anticorps polyclonal

Answer 6

Anticorps résultant du mélange de réactivités à différents épitopes de l’antigène

Question 7

Quel type de résultat est fourni par un anticorps polyclonal par rapport à un anticorps monoclonal

Answer 7

Plus sensible
Moins spécifique

Question 8

Qu’est-ce qu’un anticorps monoclonal

Answer 8

Réaction avec 1 épitope sur 1 protéine cible

Question 9

Nommer des statuts réglémentaires d’immunohistochimie

Answer 9

1. développé en laboratoire (RUO - research use only)
2. in vitro diagnostic (IVD)
3. FDA cleared

Question 10

quelles sont les caractéristiques d’un test FDA cleared

Answer 10

“Kit” avec un protocole qui doit être respecté à la lettre

toute dérive entraine la nécessité d’une validation identique à un test RUO

Question 11

Nommer 5 variables majeures à considérer lors de l’optimisation d’une IHC

Answer 11

1. Méthode de révélation de l’antigène
2. Concentration de l’anticorps primaire
3. Temps d’incubation
4. Température d’incubation
5. Méthode de blocage
6. Méthode d’amplification
7. Système de détection

Question 12

Que devrait-on viser lors de l’optimisation du titrage d’une nouvelle IHC?

Answer 12

1. obtenir la concentration la plus diluée possible (moins $ et moins de bruit de fond)
2. Optimiser la révélation antigénique (= meilleurs résultats et meilleure sensibilité même à de faible niveaux d’expression)

Question 13

Combien de témoins minimum doivent être utilisés pour la validation d’un test IHC diagnostic

Answer 13

10 témoins +
10 témoins -

Question 14

Combien de témoins minimum doivent être utilisés pour la validation d’un test IHC prédictif?

Answer 14

20 témoins +
20 témoins -

Question 15

Peut-on utiliser uniquement des micropuces tissulaires pour la validation d’un test IHC

Answer 15

Non

Question 16

Nommer 2 paramètres à prendre en compte pour le choix des cas témoins pour valider un test IHC

Answer 16

1. Usage du test
2. Le diagnostic différentiel

Question 17

Nommer 3 étalon-d’or pour valider un test d’IHC

Answer 17

1. Cas validés dans un laboratoire externe
2. Méthode orthogonale (FISH, moléculaire)
3. Morphologie et histologie

Question 18

Quel est le degré de concordance recommandé par le CAP pour une nouvelle IHC

Answer 18

90%

Question 19

Quelles sont les différentes façons de procéder à une vérification efficace de la qualité d’une IHC validée

Answer 19

1. Suivre les contrôles de qualité externes
2. Sonder les pathologistes sur la performance de l’IHC
3. Faire une contre-vérification sur l’étalon d’or PRN