Hoofdstuk 13 - Flow cytometry Flashcards
Wat is het doel van flow cytometry?
We willen cellen gaan clusteren die een bepaalde receptor tot expressie brengt. Zo kun je bv precies weten hoeveel b- en t-cellen er in het bloed zitten.
Hoe meten we de receptoren bij flow cytometry?
Door gebruik te maken van antistoffen.
Hoe gaat cytometry in zijn werk?
Alle cellen die geanalyseerd moeten worden, worden opgezogen. Deze worden geduwd doorheen de flow cytometry. Er wordt een stroom gecreëerd waarbij we een single flow krijgen en alle cellen dus netjes echter elkaar komen.
Op de plaats waar de cellen er een voor een door gaan gaan er lazers licht sturen. Omdat iedere cel apart komt kunnen we door iedere cel een aparte lichtbundel lagten gaan.
We meten de lichtverstrooiing.
FSC (forward scatter) is het licht dat door de cel zal gaan.
SSC (side scatter) geeft de mate van verstrooiing aan.
Wat is FSC?
Forward scatter cytometry, dit is het licht dat door de cel gaat.
Hoeveel licht is er door de cel gekomen?
Als dit een zeer denke cel is met veel organellen en een grote kern en weinig cytoplasma, dan zal er weinig licht doorkomen.
Wat is SSC?
Side scatter cytometry, hoe meer granules en exosomen er aanwezig zijn des te meer lichtverstrooiing.
Wat wordt er weergeven op een dot plot?
Dit is een grafiek van een bloedstaal. Op de x-as hebben we de FSC en op de y-as hebben we SSC.
Wat weet je over debri?
Dit zijn kapotte cellen. Vaak zeer klein. Op een dot plot van een cytometry te zien aan de linkeronderhoek.
Voor wat staat de L/M in een dot plot van cytometry?
Leukocyten en monocyten. Dit zijn kleien cellen, de forward scatter is klein.
Ook de side scatter is klein, meestal zijn ze niet complex of granulair.
Voor wat staat de G in een dot plot van cytometry?
Dit staat voor granulocyten, deze zijn zeer groot en bevatten veel granules.
Hoe kun je lymfocyten zichtbaar maken in cytometry?
Door middel van fluorescente merkers die aan antistoffen zitten.
In wat kunnen we de resultaten uitzetten van de cytometry?
In een dotplot. Op de x-as hebben we de FSC en op de y-as hebben we de SSC.
Verder kunnen we het ook uitzetten op een histogram, hhoe meer cellen er zijn hoe hoger de de piek.
Wat is gating?
Rondom bepaalde celpopulaties cellen apart gaan aansleuren, als we die cellen gaan aansleuren kunnen we zien uit welke zone die cellen komen.
Met wat kun je cytometry uitvoeren?
Met een celsuspensie, bijgevolg is bloed ideaal.
