Cours 7

Question 1

Qu’est-ce qu’un vecteur viral ?

Answer 1

Un vecteur viral est une construction synthétique contenant des séquences virales utilisée pour transférer du matériel génétique dans une cellule cible.

Question 2

Quels sont les différents types de vecteurs viraux ?

Answer 2

Il existe plusieurs types de vecteurs viraux, notamment : rétrovirus (lentivirus, gammaretrovirus), poxvirus, virus adéno-associés (AAV), baculovirus, adénovirus (Ads) et rhabdovirus.

Question 3

Expliquez la différence entre l’expression stable/permanente et transitoire d’un transgène.

Answer 3

Expression stable/permanente : Le transgène est intégré au génome de la cellule hôte et transmis aux cellules filles. Expression transitoire : Le transgène n’est pas intégré, rendant la modification génétique temporaire.

Question 4

Définissez la transformation génétique et la thérapie génique.

Answer 4

Transformation génétique : Introduction de gènes étrangers dans un organisme, entrainant une modification héréditaire. Thérapie génique : Stratégie thérapeutique basée sur le transfert de matériel génétique pour traiter une maladie.

Question 5

Décrivez l’expérience de Griffith et son importance dans la transformation génétique.

Answer 5

Malheureusement, les sources fournies ne décrivent pas l’expérience de Griffith.

Question 6

Differenciez les termes ‘transformation’, ‘transfection’ et ‘transduction’.

Answer 6

Transformation : Introduction de matériel génétique dans une bactérie sans vecteur viral. Transfection : Introduction de matériel génétique dans une cellule eucaryote sans vecteur viral. Transduction : Introduction à l’aide d’un virus.

Question 7

Quels sont les deux types de vecteurs viraux en fonction de leur capacité de réplication ?

Answer 7

Vecteurs réplicatifs : Se reproduisent de manière autonome. Vecteurs non réplicatifs ou défectifs : Gènes essentiels à la réplication retirés.

Question 8

Qu’est-ce qu’un plasmide d’encapsidation et quelle est son importance dans la production de vecteurs viraux non réplicatifs ?

Answer 8

Un plasmide d’encapsidation exprime les gènes viraux essentiels retirés, permettant la production de particules virales.

Question 9

Nommez les séquences essentielles présentes dans les vecteurs viraux.

Answer 9

Transgène (TG), séquences promotrices, séquence Y.

Question 10

Si vous deviez exprimer un transgène de 9 kb dans des cellules quiescentes, quel vecteur viral choisiriez-vous ? Expliquez votre choix.

Answer 10

Un vecteur lentiviral serait choisi car il transduit efficacement les cellules non divisées et peut accueillir des transgènes allant jusqu’à 10 kb.

Question 11

Décrivez la structure génomique d’un vecteur lentiviral.

Answer 11

Vecteurs lentiviraux : Virus enveloppés à ARN simple brin positif avec séquences LTR, séquence Ψ, transgène et gènes viraux modifiés.

Question 12

Comment les particules virales d’un vecteur lentiviral sont-elles produites ?

Answer 12

Production par co-transfection de plasmides d’encapsidation et vecteurs dans des cellules HEK-293, suivie de l’assemblage et de la purification des particules.

Question 13

Expliquez les différents niveaux de confinement utilisés pour les vecteurs lentiviraux.

Answer 13

Niveau de confinement 2 : Manipulation de vecteurs de première génération. Niveau de confinement 3 : Manipulation de vecteurs de deuxième et troisième génération, plus sûrs.

Question 14

Décrivez les trois générations de vecteurs lentiviraux.

Answer 14

1ère génération : Trois plasmides pour réduire le risque, pseudotypage. 2ème génération : Moins de gènes accessoires du VIH. 3ème génération : Tous les gènes accessoires supprimés, sécurité accrue.

Question 15

Pourquoi l’intégration du transgène dans le génome hôte est-elle importante ?

Answer 15

L’intégration permet l’expression permanente du transgène dans la cellule cible.

Question 16

Les vecteurs lentiviraux sont-ils utilisés comme vecteurs pour les vaccins? Expliquez.

Answer 16

Non, car l’intégration conduit à une expression permanente, alors qu’une expression transitoire est généralement souhaitée pour les vaccins.

Question 17

Quelle est la taille maximale du transgène que l’on peut insérer dans un vecteur lentiviral ?

Answer 17

Environ 10 kb.

Question 18

Pourquoi les vecteurs lentiviraux sont-ils le vecteur de choix pour modifier les cellules hématopoïétiques en thérapie génique ?

Answer 18

Ils peuvent transduire efficacement les cellules souches hématopoïétiques.

Question 19

Expliquez le terme ‘tropisme’ et son importance dans le contexte des vecteurs lentiviraux.

Answer 19

Tropisme viral : capacité d’un virus à infecter certains types de cellules. Modifications de protéines d’enveloppe permettent de cibler différents types de cellules.

Question 20

Comment les vecteurs lentiviraux peuvent-ils être utilisés pour inhiber l’expression d’une protéine ?

Answer 20

Par l’expression d’ARN d’interférence (siRNA ou shRNA) ciblant l’ARN messager de la protéine d’intérêt.

Question 21

Décrivez les étapes de la génération d’une lignée cellulaire exprimant de façon permanente une protéine de choix à l’aide d’un vecteur lentiviral.

Answer 21

1. Construction d’un vecteur lentiviral. 2. Production des particules virales. 3. Transduction des cellules cibles. 4. Sélection des cellules transduites. 5. Expansion et sélection des clones exprimant la protéine.

Question 22

Comment les vecteurs lentiviraux sont-ils utilisés pour étudier les fonctions d’une protéine ?

Answer 22

En modifiant son expression : surexpression permanente ou suppression via shRNA.

Question 23

Décrivez la structure d’un adénovirus.

Answer 23

Non enveloppé à ADN double brin linéaire avec une capside icosaédrique.

Question 24

Expliquez le rôle du récepteur CAR dans l’infection par les adénovirus.

Answer 24

La fibre de l’adénovirus se fixe au récepteur CAR, permettant l’infection de la cellule hôte.

Question 25

Décrivez les phases précoce et tardive du cycle infectieux d’un adénovirus.

Answer 25

Phase précoce : stimulation de la transcription, activité antivirale, réplication de l’ADN. Phase tardive : assemblage des particules virales, libération post-infection.

Question 26

Comment sont produits les vecteurs adénoviraux non réplicatifs?

Answer 26

Suppression de la protéine E1A, introduction dans cellules complémentaires HEK-293 pour fournir les fonctions manquantes.

Question 27

Quels sont les avantages et les inconvénients des vecteurs adénoviraux ?

Answer 27

Avantages : Capacité d’infecter diverses cellules, stabilité, grande taille d’insert. Inconvénients : Expression à court terme, réponse immunitaire élevée.

Question 28

Quelles solutions peuvent être utilisées pour contourner les limitations des vecteurs adénoviraux, notamment l’immunité préexistante ?

Answer 28

Utilisation d’adénovirus moins prévalents, modifications de la capside, prime-boost hétérologue.

Question 29

Décrivez la structure et le génome des virus adéno-associés (AAV).

Answer 29

Virus non enveloppés à ADN simple brin avec ITR et gènes codant pour protéines de réplication et de capside.

Question 30

Quels sont les avantages et les inconvénients des vecteurs AAV ?

Answer 30

Avantages : Peu pathogènes, long terme d’expression, large tropisme. Inconvénients : Petite taille d’insert, expression lente.