Cours 7 Flashcards
Qu’est-ce qu’un vecteur viral ?
Un vecteur viral est une construction synthétique contenant des séquences virales utilisée pour transférer du matériel génétique dans une cellule cible.
Quels sont les différents types de vecteurs viraux ?
Il existe plusieurs types de vecteurs viraux, notamment : rétrovirus (lentivirus, gammaretrovirus), poxvirus, virus adéno-associés (AAV), baculovirus, adénovirus (Ads) et rhabdovirus.
Expliquez la différence entre l’expression stable/permanente et transitoire d’un transgène.
Expression stable/permanente : Le transgène est intégré au génome de la cellule hôte et transmis aux cellules filles. Expression transitoire : Le transgène n’est pas intégré, rendant la modification génétique temporaire.
Définissez la transformation génétique et la thérapie génique.
Transformation génétique : Introduction de gènes étrangers dans un organisme, entrainant une modification héréditaire. Thérapie génique : Stratégie thérapeutique basée sur le transfert de matériel génétique pour traiter une maladie.
Décrivez l’expérience de Griffith et son importance dans la transformation génétique.
Malheureusement, les sources fournies ne décrivent pas l’expérience de Griffith.
Differenciez les termes ‘transformation’, ‘transfection’ et ‘transduction’.
Transformation : Introduction de matériel génétique dans une bactérie sans vecteur viral. Transfection : Introduction de matériel génétique dans une cellule eucaryote sans vecteur viral. Transduction : Introduction à l’aide d’un virus.
Quels sont les deux types de vecteurs viraux en fonction de leur capacité de réplication ?
Vecteurs réplicatifs : Se reproduisent de manière autonome. Vecteurs non réplicatifs ou défectifs : Gènes essentiels à la réplication retirés.
Qu’est-ce qu’un plasmide d’encapsidation et quelle est son importance dans la production de vecteurs viraux non réplicatifs ?
Un plasmide d’encapsidation exprime les gènes viraux essentiels retirés, permettant la production de particules virales.
Nommez les séquences essentielles présentes dans les vecteurs viraux.
Transgène (TG), séquences promotrices, séquence Y.
Si vous deviez exprimer un transgène de 9 kb dans des cellules quiescentes, quel vecteur viral choisiriez-vous ? Expliquez votre choix.
Un vecteur lentiviral serait choisi car il transduit efficacement les cellules non divisées et peut accueillir des transgènes allant jusqu’à 10 kb.
Décrivez la structure génomique d’un vecteur lentiviral.
Vecteurs lentiviraux : Virus enveloppés à ARN simple brin positif avec séquences LTR, séquence Ψ, transgène et gènes viraux modifiés.
Comment les particules virales d’un vecteur lentiviral sont-elles produites ?
Production par co-transfection de plasmides d’encapsidation et vecteurs dans des cellules HEK-293, suivie de l’assemblage et de la purification des particules.
Expliquez les différents niveaux de confinement utilisés pour les vecteurs lentiviraux.
Niveau de confinement 2 : Manipulation de vecteurs de première génération. Niveau de confinement 3 : Manipulation de vecteurs de deuxième et troisième génération, plus sûrs.
Décrivez les trois générations de vecteurs lentiviraux.
1ère génération : Trois plasmides pour réduire le risque, pseudotypage. 2ème génération : Moins de gènes accessoires du VIH. 3ème génération : Tous les gènes accessoires supprimés, sécurité accrue.
Pourquoi l’intégration du transgène dans le génome hôte est-elle importante ?
L’intégration permet l’expression permanente du transgène dans la cellule cible.
Les vecteurs lentiviraux sont-ils utilisés comme vecteurs pour les vaccins? Expliquez.
Non, car l’intégration conduit à une expression permanente, alors qu’une expression transitoire est généralement souhaitée pour les vaccins.
Quelle est la taille maximale du transgène que l’on peut insérer dans un vecteur lentiviral ?
Environ 10 kb.
Pourquoi les vecteurs lentiviraux sont-ils le vecteur de choix pour modifier les cellules hématopoïétiques en thérapie génique ?
Ils peuvent transduire efficacement les cellules souches hématopoïétiques.
Expliquez le terme ‘tropisme’ et son importance dans le contexte des vecteurs lentiviraux.
Tropisme viral : capacité d’un virus à infecter certains types de cellules. Modifications de protéines d’enveloppe permettent de cibler différents types de cellules.
Comment les vecteurs lentiviraux peuvent-ils être utilisés pour inhiber l’expression d’une protéine ?
Par l’expression d’ARN d’interférence (siRNA ou shRNA) ciblant l’ARN messager de la protéine d’intérêt.
Décrivez les étapes de la génération d’une lignée cellulaire exprimant de façon permanente une protéine de choix à l’aide d’un vecteur lentiviral.
- Construction d’un vecteur lentiviral. 2. Production des particules virales. 3. Transduction des cellules cibles. 4. Sélection des cellules transduites. 5. Expansion et sélection des clones exprimant la protéine.
Comment les vecteurs lentiviraux sont-ils utilisés pour étudier les fonctions d’une protéine ?
En modifiant son expression : surexpression permanente ou suppression via shRNA.
Décrivez la structure d’un adénovirus.
Non enveloppé à ADN double brin linéaire avec une capside icosaédrique.
Expliquez le rôle du récepteur CAR dans l’infection par les adénovirus.
La fibre de l’adénovirus se fixe au récepteur CAR, permettant l’infection de la cellule hôte.
Décrivez les phases précoce et tardive du cycle infectieux d’un adénovirus.
Phase précoce : stimulation de la transcription, activité antivirale, réplication de l’ADN. Phase tardive : assemblage des particules virales, libération post-infection.
Comment sont produits les vecteurs adénoviraux non réplicatifs?
Suppression de la protéine E1A, introduction dans cellules complémentaires HEK-293 pour fournir les fonctions manquantes.
Quels sont les avantages et les inconvénients des vecteurs adénoviraux ?
Avantages : Capacité d’infecter diverses cellules, stabilité, grande taille d’insert. Inconvénients : Expression à court terme, réponse immunitaire élevée.
Quelles solutions peuvent être utilisées pour contourner les limitations des vecteurs adénoviraux, notamment l’immunité préexistante ?
Utilisation d’adénovirus moins prévalents, modifications de la capside, prime-boost hétérologue.
Décrivez la structure et le génome des virus adéno-associés (AAV).
Virus non enveloppés à ADN simple brin avec ITR et gènes codant pour protéines de réplication et de capside.
Quels sont les avantages et les inconvénients des vecteurs AAV ?
Avantages : Peu pathogènes, long terme d’expression, large tropisme. Inconvénients : Petite taille d’insert, expression lente.
