Cours 4- Séquençage 1

Question 1

Nommez 5 raison pour séquencer de l’ADN.

Answer 1

1. Trouver la structure des gènes et la phylogénie
2. Déterminer la structure d’un gène et potentiellement sa fonction
3. Détecter les polymorphismes
4. Analyser des variations génétiques
5. Prédire les produits possibles de fragments d’ADN

Question 2

Vrai ou faux. Lorsqu’on a fini le séquençage de l’ADN d’un organisme, il n’y a pas d’étapes subséquentes.

Answer 2

Faux. On doit également faire l’usage de la biologie et de la biochimie pour trouver la fonction de certains gènes.

Question 3

À quel moment sont apparues les premières méthodes de séquençage de l’ADN?

Answer 3

Au milieu des années 70

Question 4

Qui est le créateur de la méthode chimique de séquençage?

Answer 4

Walter Gilbert

Question 5

Qui est le créateur de la méthode enzymatique de séquençage?

Answer 5

Fred Sanger

Question 6

Avec quoi l’ADN est-il marqué lors de la méthode chimique?

Answer 6

Gamma 32-P ATP

Question 7

Vrai ou faux. La méthode chimique emploie une technique d’hydrolyse complète de l’ADN.

Answer 7

Faux. C’est une hydrolyse partielle et limitée

Question 8

Les purines peuvent être méthylées par quel produit chimique?

Answer 8

DMS

Question 9

Les pyrimidines peuvent être modifiées par quel produit chimique?

Answer 9

Hydrazine

Question 10

Quel est l’effet d’un traitement à la piperidine?

Answer 10

Clivage des brins apyrimidiques ou apurinidiques générant des fragments de taille correspondant à la position des nucléotides modifiés par le DMS ou l’hydrazine

Question 11

Pourquoi dit-on que la méthode chimique est capricieuse?

Answer 11

Car elle est très sensible à la fraicheur et à la pureté des réactifs.

Question 12

Il faut utiliser 2 concentrations de gel en polyacrylamide différentes pour la technique chimique. Quelles sont ces concentrations, et quelles sont leurs utilités?

Answer 12

1- 20% : visualiser les nucléotides très près du site de marquage
2- 8% pour lire plus loin

Question 13

Sur quoi repose la méthode enzymatique?

Answer 13

Sur l’interruption d’élongation de l’ADNpol lorsque l’enzyme est en présence de ddNTP

Question 14

Qu’est ce qui caractérise un di-désoxynucléotide?

Answer 14

Un di-désoxynucléotide n’a pas de-OH à son extrémité 3’ comparativement au désoxyribonucléotide.

Question 15

Quel marqueur utilise-t-on dans la méthode enzymatique, et quel avantage procure-t-il?

Answer 15

On utilise le alpha35S ATP, qui permet une meilleure résolution que les autres marqueurs radioactifs connus.

Question 16

Qu’est ce qu’une amorce universelle?

Answer 16

C’est une amorce interne à l’insert d’ADN à séquencer ou au vecteur de clonage dans lequel se trouve l’insert

Question 17

La méthode enzymatique subit une hydrolyse partielle .

Answer 17

Faux. Elle subit une élongation partielle.