Cours 2 Flashcards
Expliquez le principe de demi-vie pour les atomes radioactifs.
La moitié des atomes radioactifs sont désintégrés durant la période de temps correspondant à la demi-vie.
Quelle est la demi vie du 32P?
14 jours
Comment peut-on incorporer le 35S à l’ADN?
Comme il n’y a pas de S dans l’ADN, on doit modifier les nucléotides pour pouvoir incorporer ce radioisotope. On utilise des dérivés du phosphorothiate, où un oxygène est remplacé par un atome de 35S.
Nommez 2 avantages de l’utilisation du 35S par rapport au 32P dans la détection de l’ADN
1- Plus longue demi-vie (88 jours vs 14)
2- Plus faible énergie d’émission, ce qui donne des bandes plus précises et moins floues sur le gel
Si on veut mesurer la radioactivité d’un échantillon placé sur gel, quelle technique devons nous utiliser pour détecter la bande?
Autoradiographie
Si on veut mesurer la radioactivité d’un échantillon en liquide ou sur papier filtre, quelle technique devons nous utiliser?
Comptage à scintillation
Expliquez en bref le principe du comptage à scintillation.
Utilisation d’un produit chimique nommé scintillant, qui émet des pulses de lumières lorsqu’un électron de haute énergie est relâché par l’isotope radioactif dans l’ADN. Les pulses de lumières sont détectés par une cellule photo-électrique.
Donnez un exemple d’application du comptage à scintillation
Mesure du taux de réplication d’une souche bactérienne, qui représente en même temps une mesure de la viabilité.
Expliquez le principe en bref de l’autoradiographie.
Émission de béta particules qui font noircir un film photographique.
Expliquez le principe de fluorescence
La fluorescence survient lorsque qu’une molécule absorbe la lumière d’une longueur d’onde particulière et émet de la lumière de plus faible énergie d’une longueur d’onde plus longue.
Nommez 2 choses qu’on a besoin pour la détection de la fluorescence.
Un faisceau lumineux pour exciter le colorant, et un photodétecteur pour détecter l’émission de la fluorescence.
Vrai ou faux. La biotine et la digoxigénine sont des colorants fluorescents.
Faux.
L’analogue de la thymine (EdU) est utiliisé à quel fin dans la détection de l’ADN?
On peut voir directement l’ADN en réplication
Qu’est ce qu’un ADN hybride?
2 sb apparentés qui se sont mis ensemble lors de l’appariement. Peuvent provenir de deux molécules d’ADN différentes.
Quelle technique doit-on utiliser pour détecter une séquence d’ADN dans la cellule.
FISH : hybridation fluorescente in situ
Comment se fait la détection en 2 étapes de l’ADN grâce à la biotine?
1- Liaison de l’avidine à la biotine. L’avidine est conjuguée avec une enzyme appelée alkaline phosphase, qui peut couper des liens P à des molécules diverses
2- Des substrats comme X Phos ou Lumi-phos sont ajoutés. L’alkaline phosphatase enlève les P de ces substrats. Le X phos réagit avec l’oxygène, et forme un colorant bleu, alors que lumi-phos produit de la lumière lorsque débarassé de son groupement P
Un analogue de la thymine est utilisé pour marquer l’ADN en réplication. Comment se nomme-t-il?
EdU
Vrai ou faux. On peut visualiser la réplication dans la cellule grâce à un anticorps qui reconnait BrdU.
Faux, l’anti-corps est beaucoup trop gros pour accéder à l’ADN double-brin.
Qui aura la température de fusion la plus élevée? Une séquence G-C riche, ou une séquence A-T riche?
Une séquence G-C riche
Vrai ou faux. Dans les brins d’ADN hybrides, il est possible que des bases ne soient pas complémentaires.
Vrai. Quand il y a appariement, si deux brins d’ADN qui se ressemblent mais ne sont pas identiques se mettent ensemble, il y aura nécessairement certaines séquences qui diffèrent.
Vrai ou faux. On peut utiliser les techniques d’hybridation pour des applications en clonage.
Vrai.
Quelle est l’utilité d’une sonde lors d’expérience d’hybridations?
Comme la sonde est marquée radioactivement ou avec de la fluorescence, elle sert à repérer des régions/séquences semblable dans un échantillon expérimental.
Comment fonctionne l’hybridation de type Southern?
1-L’ADN complet de l’espèce dont on veut vérifier une séquence est digéré par un enzyme de restriction, et les fragments générés sont séparés par électrophorèse sur gel.
2-Les fragments sont ensuite séparés, en trempant le gel dans une solution d’hydroxide de sodium.
3- L’ADN est ensuite transféré par buvardage sur une membrane de nylon.
4- La membrane de nylon est trempée dans une solution contenant la sonde ADN marquée, et va se fixer solidement aux régions avec une forte homologie.
5- Un papier photographique va ensuite nous permettre de visualiser les bandes correspondantes (autoradiographie)
Vrai ou faux. La technique FISH permet de localiser un gène d’intérêt sur le chromosome.
Vrai.
