CM 10 - Génétique et néoplasies hématologiques Flashcards
les méthodes _______________ disponibles dans les hôpitaux permettent de définir les orientations thérapeutiques de plusieurs cancers hématologiques
moléculaires
C’est quoi la médecine personnalisée/ciblée?
- médicament qui fonctionne slm si une anomalie génétique quelconque est présente (coûteux mais efficaces)
- Beaucoup de nouveaux médicaments coûteux et efficaces seulement dans certains sous-groupes qui sont définis moléculairement
La cytogénétique c’est l’étude de quoi? Biologie moléculaire ?
+
Quels sont leurs examens et qu’est-ce qu’ils étudient ?
Cytogénétique:
- étude des chromosomes
- CARYOTYPE (arrêt en métaphase) : (vision complète du génome)
- FISH en interphase : (anomalies ciblées)
Biologie mléculaire:
- L’étude des gènes dans l’ADN
- PCR quantitative en temps réel (Q-PCR)
* Séquençage : ATTCGGCTTAT
Vrai ou faux, le caryotype permet de ciblée les anomalies
faux
C’est LE FISH, le caryotype permet d’avoir vision globale de tous tes chromosomes étalées/génome complet)
Étape de Cytogénétique:
Caryotype standard et leur spécimen
- Mise en culture du spécimen
- Colchicine: arrêt en métaphase
- Choc hypotonique, étalement sur lame et fixation
- Digestion trypsine et coloration Giemsa (bande G)
- Photographie ou numérisation des métaphases
- Résolution du casse tête…
Spécimen = sang périphérique, moelle
Qui suis-je? Technique qui permet l’identification d’anomalies de nombre (aneuploïdie) et de structure (translocation, large délétion)
CARYOTYPE
Vrai ou faux, puisque le caryotype permet d’avoir une vision globale de tous tes chromosomes étalées/génome complet, on dit qu’il est SENSIBLE et avec une BONNE RÉSOLUTION
FAUX! le caryotype est PEU SENSIBLE et avec une basse résolution
(examine que 20 cellules)
Importance de la cytogénétique,
Une cytogénétique favorable c’est cmb de % de chance de survie?
Une cytogénétique défavorable c’est cmb de %?
- Preuve de clonalité
- Peut être diagnostic d’une pathologie
– Exemple : t(9;22)= Leucémie Myéloïde Chronique - Le caryotype est un facteur pronostique majeur (LMA) :
Une cytogénétique favorable = 60-80 % à long terme
Une cytogénétique défavorable < 10% de survivants à long terme
Le FISH permet la détection de quoi? + Exemple
Ne révèle qu’une seule anomalie :
Celle qu’on cherche !
-Aneuploidie et translocation
- Fusion= t(9;22)
Pourquoi même si le FISH ne révèle qu’une seule anormalie on l’utilise en laboratoire ?
Rapidité, moins laborieux que caryotype (24h)
Ne nécessite pas cellules en métaphase (comme caryotype)
Sensibilité accrue de 500 cellules (donc + sensible)
Fonctionnement du FISH et ce qu’il décèlle ? Sur les noyaux en quel phase ?
Utilise segments d’ADN fluorescents sous forme d’amorces spécifiques -> se lient à des séquences d’ADN connues -> dénaturation/hybridation => cherche signal d’hybridation
Aneuploïdie, translocations(mais juste une anomalie)
Sur noyau en interphase
Quel type d’anomalie sont détectée par caryotype?
et par fish?
caryotype : l’identification d’anomalies de nombre (aneuploïdie) et de structure (translocation, large délétion)
FISH : Aneuploïdie, translocations
La biologie moléculaire est l’étude de quoi?
Étude des gènes anormaux de l’ADN
LES TESTS PCRs
Que permet le Monitoring de l’amplification de l’ADN fait pendant les cycles du PCR en temps réel ? Sensibilité de l’examen PCR
– Permet quantification
– Très sensible: 1 cellule /10^6
* Ceci permet surveillance de MRD = maladie résiduelle minime
Quel est le but de PCR quantitative en temps réel (Q-PCR)/TAQMAN ?
Amplification de séquences d’ADN cibles en utilisant des amorces spécifiques
– «Molecular photocopying »
– Car ADN dans échantillon brut = quantité insuffisante pour analyses, donc PCR requis pour amplification
Quelle est la différence entre le PCR quantitative en temps réel et la RT-PCR (reverse transcriptase)? Pourquoi c’est utile?
- PCR quantitative en temps réel : le point de départ c’est l’ADN
- RT-PCR : le point de départ c’est de l’ARN messager. Ensuite tu convertit en ADN double Brin et tu l’amplifie via PCR
Utilité:
- ARN un peu plus « labile » mais utile quand les « break
points » potentiels dans la séquence d’ADN couvrent de
grandes distances et sont nombreux.
- Ex. LMC: breakpoint potentiels entre BCR et ABL couvrent plusieurs kilobases de séquences d’ADN, DONC amplification d’ADN laborieuse avec besoin de plusieurs amorces différentes (impossible!) vs mRNA = prévisible avec juste 2 splicing variants
% des leucémie myéloïde aigue avec un caryotype normal ? Donc ….
50%,
Donc certaines mutation qui sont associé a des meilleur ou mauvais prognostic
Quelle mutations pour la LMA indiquent un mauvais pronostic (2) et un Bon (2)
Quelles mutations peut-on retrouver dans 30% des LMA ? Associé à un bon ou mauvais prognostic?
FLT-3 ITD (mauvais pronostic)
Vrai ou faux, la mutation du récepteur FLT-3 ITD est acquis précocément dans la leucemogénèse (développement de la leucémie)
faux! acquis TARDIVEMENT
Vrai ou faux, la mutation du récepteur FLT-3 ITD a un fardeau allélique invariable dans la LMA
FAUX ! VARIABLE
quel est le phénotype qui accompagne la mutation FLT-3 ITD dans la LMA (3)
- LMA rapidement proliférative
- Hyperleucocytaire
- Maladies chimiosensibles mais rapidement récidivantes
Décris le récepteur de FLT-3 et son rôle
- Récepteur à activité Tyr kinase hautement exprimé dans les progéniteurs et LMAs
- Rôle: survie, prolifération, différentiation cellules hématopoiétiques
Quelles sont les 2 mutations qui hit le récepteur FLT 3-dans la LMA ? et leurs pourcentage
o Mutation duplication interne (ITD) dans l’exon 14: 20-25%
- ITD: La duplication intercale un peptide dans la boucle d’activation menant à une activation constitutive
o Mutation ponctuelle d835 (tyrosine kinase domain; TKD) exon 20: 5 -10%
Les inhibiteurs de FLT-3 sont classés selon quoi pour la LMA?
Classes les (3)
En fonction du niveau de sélectivité de kinase
Midostaurin (1ère génération) < Sorafenib (1ère génération) < Gilteritinib (2e génération)
Le _____________ est incorporé à la chimiothérapie d’induction en présence d’une mutation FLT-3 ITD/TKD comme Agents de 1ere ligne et entretien de LMA
Midostaurin (1ère génération)
Le_____________est utilisé en entretien post greffe allogénéique pour les patients avec LMA associées à une mutation FLT-3 ITD comme Agents de1ere ligne et entretien:
Sorafenib
Depuis janvier 2020, quel changement dans le traitement d’une LMA avec mutation FLT-3 ITD?
Le Gilterinib est maintenant accepté au Canada pour traiter une rechute de LMA FLT-3 ITD/TKD en remplacement d’une chimiothérapie d’induction