Clonage Des Genes 2

Question 1

que a faire la méthylation des bases de restriction ?

Answer 1

va empêcher l’enzyme de restriction de couper le site

Question 2

qu’a chaque enzyme de restriction (ER) ?

Answer 2

sa propre méthylase qui ait sur la même seq d’ADN

Question 3

comment coupent les ER ?

Answer 3

coupent les deux brins au site de restriction.
→ coupure avec formation de bouts francs ou bouts collants ou extrémités cohésives

Question 4

sur quoi est basée la complémentarité entre 2 extrémités générées par coupure avec une enzyme de restriction ?

Answer 4

basée sur une complémentarité parfaite de seq

Question 5

carte de restriction d’un fragment d’ADN ?

Answer 5

l’emplacement des sites de restriction sur le fragment en respectant la distance qui les séparent

Question 6

qu’est-ce que l’on voit sur gel ?

Answer 6

profil de migration des fragments d’ADN après coupures par une pu pls enzymes de restriction

Question 7

propriété d’un vecteur de clonage ?

Answer 7

• doit posséder une origine de réplication → réplication autonome dans une C hôte donnée (mini K)
• doit présenter un syst de sélection → résistance aux antibiotiques
• doit posséder u polylinker ou un site multiple de clonage (SMC ou MCS)

Question 8

type de vecteur et taille de ADN cloné en kb ?

Answer 8

taille max approximative du fragelnt ADN qui peut être cloné dans chaque vecteur :
- plasmide = 20
- Phage 𝜆 = 25
- cosmide = 45
- Phage 1 = 100
- BAC = 300
- YAC = 1000

Question 9

comment sont les plasmides bactériens ?

Answer 9

• extraKq, circulaires et capables de réplication autonome
• ils portent le gène de résistance à un antibiotique

Question 10

comment est l’origine de réplication : Ori (Ori C pour E. coli) ?

Answer 10

→ 1-100 copies/ C baté
→ petite taille
→ réplication indépendante du K bactérien
→ répartition aléatoire