Clonage Des Genes 1 Flashcards
concept du clonage moléculaire, l’organisme donneur ?
extraction et coupure de l’ADN en fragments contenant un ou pls fragments d’intérêt
concept du clonage moléculaire, le vecteur ?
vecteur ou transporteur d’ADN, un fragment d’ADN circulaire capable de réplication autonome
concept du clonage moléculaire, après avoir l’organisme donneur et le vecteur ?
insertion individuelle de chaque fragment de l’organisme donneur dans une molécule de vecteur
concept du clonage moléculaire, après l’insertion ?
obtention de l’ADN recombinant :
Nouvelle combinaison de l’ADN d’un génome donneur (qui peut être de n’importe quel organisme) avec l’ADN d’un vecteur (qui peut être d’origine complètement différente)
qu’est-ce que l’ADN recombinant ?
combinaison entre l’ADN d’un organisme donneur et celui d’un vecteur (qui eut-être d’une espèce totalement ≠)
qu’est-ce que le génie génétique ou technologie de l’ADN recombinant ?
ensemble de techniques de construction d’un ADN recombinant
qu’est-ce que le clonage moléculaire ?
isolement et amplification d’un fragment d’ADN par introduction dans une cellule hôte après son insertion dans un vecteur (ADN recombinant)
qui et quand a découvert l’existence des enzymes de restriction ?
W. Aber en 1960
qui et quand a découvert des plasmides bactériens ?
S. Cohen en 1960
qui et quand découvre et purifie l’ADN ligase ?
M. Geller en 1967
qui et quand a mis au point la méthode permettant aux C bacté (E. coli) à importer des plasmides étrangers → transformation bactérienne par le plasmide ?
S. Cohen en 1971
date des découvertes de S. Cohen ?
1960 : découverte des plasmides bactériens
1971 : a mis au point la méthode permettant aux C bacté (E. coli) à importer des plasmides étrangers → transformation bactérienne par le plasmide
définition du clonage d’un gène ?
amplification d’un fragment d’ADN par introduction dans une C hôte après son insertion dans un vecteur (ADN recombinant)
définition clonage d’un organisme ?
opération consistant à produire pls organismes génétiquement identiques. Le clonage peut être effectué à partir de C provenant d’un individu adulte, ou de C issues d’un même embryon
intérêt du clonage : application ?
produire des molécules trop complexes à $ par voie chimique (ADN), ou constituent une alternative plus intéressante en regard d’autres procédés d’obtention de molécules actives
ex : l’hormone de croissance humaine
qu’est-ce que le nanisme ?
absence d’une hormone de croissance la somatotropine produite par l’hypophyse
que se passe t il si le nanisme est diagnostiqué suffisamment tôt ?
si cette insuffisance est diagnostiquée suffisamment tôt, on peut donner aux enfants des hormones de croissances supplémentaire
qu’est-ce que l’hormone somatotropine ?
- chez l’homme, l’hormone de croissance somatotropine est une protéine de 191 aa produite à partir du gène GH-1
- c’est une protéine qui ne nécessite pas de modification post-traductionnelles
pourquoi isoler le gène GH-1 ?
isoler ce gène du génome humain, le placer dans un organisme que l’on peut facilement faire multiplier pour en obtenir de grandes quantités (bactéries)
avantages qualitatifs du clonage d’un gène ?
après purification, obtention d’une hormone pure, non contaminée par des virus, des bactéries ou par des prions
avantages quantitatifs du clonage d’un gène ?
une seule cuve contenant 500L de bactéries produit la même quantité d’hormones de croissance que 35 000 hypophyse humaines
que produisent les industries biotechnologiques actuellement ?
produisent l’hormone de croissance par génie génétique. c’est ma bactérie Escherichia coli qui est capable de produire cette hormone
quels outils enzymatique utiliser pour fabriquer un ADN recombinant ?
2 outils enzymatique principalement :
- endonucléases de restriction (coupent ADN à des seq spécifiques ; génèrent extr franches ou cohésives)
- ADn ligase (catalyse la formation de liaisons phosphodiester entre les extr de ADN, permet “coller” le fragment d’intérêt au vecteur, créant mol ADN recombinant stable
quels vecteur de clonage utiliser pour fabriquer un ADN recombinant ?
- plasmides pour la plupart des clonages classiques
- phages (vecteur viraux capables d’infecter les bactéries)
- cosmides (hybride entre plasmides et phages 𝜆 ; utilisé pour insérer de très grands fragments d’ADN (jusqu’à ≈45kb)
- BAC ou YAC pour les très gros fragments
