Biochimie M1 S4 (complet) Flashcards
Avec l’aide de quel appareil se fait l’étude des cellules ?
Microscopes plus ou moins performants
Par quel moyen se fait l’obtention d’un échantillon de tissus en provenance d’un organisme vivant ?
Biopsie
Quelle est la taille d’une cellule ?
Entre 10 et 100 um
Comment peut-on voir les organites cytoplasmiques ?
A la microscopie électronique
Quelles sont les méthodes d’études des cellules ?
- La microscopie optique
- La microscopie électronique
- Les méthodes d’étude de la composition cellulaire
- La culture cellulaire
- L’immuno-sérologie
Qu’est-ce que la microscopie optique ?
Il s’agit d’études effectuées à l’aide d’un microscope, assemblage plus ou moins complexe de lentilles (généralement deux) et d’une source de lumière, permettant d’obtenir différents grossissements de l’image
La résolution de cet appareil peut atteindre combien de micromètre ?
0,2 micromètre
Pourquoi la méthode de la microscopie optique nécessite la coloration et la fixation ?
Sans la coloration et la fixation, la cellule resterait transparente et donc invisible
Pourquoi la méthode de la microscopie optique nécessite des coupes très fines ?
Pour observer les structures de manière indépendante en limitant les superpositions
Lors de la microscopie optique, comment peut se faire l’étape de la fixation des structures ?
- Par déshydratation
- Par congélation
Quelles sont les étapes de la méthode de la microscopie optique ?
- Prélèvement de tissu ou de cellules (par biopsie ou pds)
- Fixation des structures (permet de stabiliser les structures cellulaires)
- Découpage (le tissu est découpé un fines lamelles à l’aide d’un microtome)
- L’échantillon est soumis à des techniques de visualisation des structures (coloration)
Que permet la congélation ?
Des coupes très fines, sans inclusions préalable
Quelles sont les principales colorations utilisées ?
- L’hématoxyline-éosine
- Rouge carmin
- Résorcine
- Fuschine
Que permet la microscopie électronique contrairement à la microscopie optique ?
Elle permet une meilleure résolution (jusqu’à 0,5 angström (0,5x10-10m)) et un agrandissement plus poussé (plusieurs milliers de fois)
De quelles étapes la microscopie électronique a-t-elle besoin ?
- Interaction potentielle des électrons avec la matière vivante, et notamment avec l’eau qu’elle contient
- Préparation par déshydratation ou cryogénisation
- Traitement permettant d’accentuer le contraste entre différentes structures
Quelles sont les deux techniques utilisées pour la microscopie électronique ?
- La microscopie électronique à transmission
- La microscopie à balayage (utilisant un faisceau d’électrons
émis depuis un canon et qui fonctionne comme une « sonde » qui explore l’échantillon)
Comment fonctionne la microscopie électronique à transmission ?
Un faisceau d’électrons
est transmis à travers un échantillon très fin à étudier
Comment fonctionne la microscopie à balayage ?
Utilise un faisceau d’électrons
émis depuis un canon et qui fonctionne comme une « sonde » qui explore l’échantillon
En quoi consiste la spectrométrie ?
Elle consiste à décomposer une donnée en ses constituants, comme décomposer un mélange de molécules en ses plus simples composantes selon leur masse et de préciser ainsi leurs caractéristiques chimiques
(spectrométrie de masse)
Comment est effectuée l’analyse ?
Elle est effectuée en phase gazeuse. Elle permet notamment de définir la composition chimique des molécules
Qu’est-ce que la chromatographie ?
C’est une méthode de séparation des constituants d’un mélange en phase liquide par exemple
Quel est le principe de la chromatographie ?
Le principe consiste à utiliser deux phases :
- Une fixe et une mobile (liquide ou gazeuse)
Une substance va ainsi être entraînée avec la phase mobile si son affinité pour cette phase est importante, ou va plutôt rester immobile si son affinité s’exerce davantage avec la phase fixe
Expliquer la chromatographie d’exclusion
Une adaptation de la méthode consiste à faire traverser une solution moléculaire par un milieu de billes poreuses.
Le passage des molécules se fait alors en fonction de leur taille (masse moléculaire) ainsi que de leur configuration
spatiale
Expliquer la chromatographie à
échange d’ions
Elle utilise des résines chargée en anions ou cations.
Les molécules de charge électrique opposée seront immédiatement fixées sur la résine alors que les molécules neutres ou de même charge resteront libres dans
la phase mobile
Que permet la résine chargée ?
La résine chargée permet de retenir les ions complémentaires : u
- Une résine chargée positivement permet de retenir les anions
- Une résine chargée négativement permet de retenir les cations
Citer un exemple d’utilisation de la chromatographie
Par exemple la séparation des acides gras selon leur masse moléculaire, ce qui
permet de définir la composition d’un échantillon
Quel est le principe de l’histochimie ?
C’est de mettre en évidence une famille de molécules (ou le produit d’une activité
enzymatique) grâce à son affinité tinctoriale
Que permet cette méthode ?
Elle permet d’identifier les acides nucléiques
par la coloration (vert de méthyle pour l’ADN et pyronine pour l’ARN) et par lyse enzymatique, basée sur l’utilisation
d’enzymes spécifiques (DN-ase et RN-ase)
Que fait l’immunohistochimie ?
Elle utilise des anticorps marqués pour visualiser un substrat (technique du Western Blot).
Que permet la cytométrie de flux ?
Elle permet un décompte par faisceau
laser des cellules ayant éventuellement été au préalable marquées avec un anticorps spécifique traçable
Que permet le fractionnement cellulaire ?
Il permet de détruire la membrane pour ensuite séparer les organites par centrifugation, selon leur poids
A quoi fait appel l’étude des protéines et des acides aminés ?
A l’électrophorèse
Sur quoi est basée cette méthode ?
Sur la vitesse de migration des molécules polarisées dans un champ électrique
Que permet la culture cellulaire ?
Elle permet d’induire la multiplication des cellules en dehors de l’organisme d’origine et permet leur étude plus approfondie
Les cellules cultivées peuvent être :
- Mobiles (les cellules sanguines) ou
- Adhérentes, constituées en tissu
Que fait-on après prélèvement ?
On sépare les cellules par des méthodes :
- Mécaniques ou chimiques (enzymatiques)
A la suite de quoi, on les place dans des milieux adaptés, généralement à 37 °C, en présence de dioxygène et de faibles concentrations de CO2, sur un support synthétique ou milieu liquide (selon que l’on veut obtenir des cellules ou une structure tissulaire)
Pourquoi les cellules cultivées in vitro peuvent parfois être très différentes des cellules in vivo ?
Car elles gardent le plus souvent
leur capacité de prolifération mais perdent les caractères spécifiques par une dédifférenciation plus ou moins
prononcée
Que permet l’immuno- sérologie ?
Elle permet de dépister les molécules présentes en surface des cellules
En quoi est-elle utile ?
Elle est utile pour définir les
caractères immunologiques des cellules qui caractérisent la compatibilité tissulaire entre deux individus (lors de transfusion sanguine ou de greffe d’organe)
Sur quelle méthode est basée l’immuno- sérologie ?
Elle est basée sur le fait que toutes les cellules présentent des protéines et glycoprotéines de surface membranaire à fonction d’antigènes, et qui leur confèrent une spécificité immunitaire
Sous quoi sont regroupées ces molécules ? (co
Ces molécules sont regroupées
sous le terme de complexe majeur d’histocompatibilité (CMH)
