VL1-Klonierung (1 Frage nicht dabei, weil kein bock auf bild machen)

Question 1

Warum spielen Mitochondrien eine Rolle für den Erfolg des Klonierens beim Kerntransfer, aber nicht beim Embryo Splitting?

Answer 1

Da beim Kerntransfer erfolgt ein Transfer vom Zellkern einer Zelle ( bei Dolly Euterzelle) in die Eizelle eines anderen Tieres, wo zuvor der Zellkern entfernt wurde. Da nur die Eizelle Mitochondrien hat und die Befruchtung nur mit einer einzelnen befruchteten Eizelle erfolgt, ist das Vorhandensein des Mitochondriums in der Eizelle sehr sehr wichtig. Mitochondrien hat eigenes DNA, was mit dem Kern zusammenspielt.

Beim Embryo Splitting erfolgt eine Spaltung der Embryo ab einem Mehrzellstadiun(zb 6 od. 8 Zellstadium). Hierfür sind zwar Mitochondrien auch sehr wichtig, allerdins befinden sich die Zellen in einer permanenten Teilungsphase, was das Fehlen von Mitochondrien in einzelne Zellen weniger problematisch macht.

Question 2

Wie kann man ausschließen, dass Dolly durch eine nicht erkannte Befruchtung entstanden ist?

Answer 2

Die Leihmutter(3te Mutter) ist phänotypisch verschieden vom Dolly.

Question 3

Weiße Kolonien, aber kein längeres Insert nach Restriktionsverdau? Wieso?

Answer 3

Lac Z ist kaputt. Eventuell Leserasterverschiebung

Question 4

Wie heißt das erste jemals geklonte größere Tier?

Answer 4

Dolly

Question 5

2 Plasmide, die multi-copy vorliegen, nennt man:

a) String Plasmide
b) Relaxierte Plasmide
c) Kryptische Plasmide
d) Alles falsch

Answer 5

b

Question 6

2 Plasmide wurden fusioniert: kann so nicht isoliert werden aus E.Coli, warum?

Answer 6

Wegen 2 Origins of Replication, Polymerase würden gegeneinander knallen.

Question 7

Welche Art Enzyme brauchen Sie, um mittels Gate-Way-Technologie zu klonieren?

Answer 7

Integrase (int), ist ein Nukleotidyltransferase. ist ein Enzym von Retroviren, das für den Einbau viraler DNA-Stränge in die Chromosomen der Wirtszelle zuständig ist. Sie ist eines von drei Schlüsselenzymen der Retroviren
Integrase Host Factor (IHF)
Excisionase (XIS)

Question 8

Verbinden Sie die Vektorattribute und die Funktion. Nicht Alle Antworten müssen genutzt werden.
...1...Restriktionsstelle
...2..Replikationsursprung
...3...Promotor
...4...Antibiotikaresistenz

A)Wird für die Expression des Inserts gebraucht
B) Erlaubt die Insertion von DNA in den Vektor
C) Kodiert ein Enzym
D) Erlaubt Selektion von Bakterien, die den Vektor aufgenommen haben
E)Wird zur Duplikation des Vektors benötigt
F) Wird für die Bindung von SRP benötigt (signal recognition partikel)
G) Ribosomenbindestelle

Answer 8

1)B ,2) E,3)A ,4)D

Question 9

Welche enzymatische Aktivitäten brauchen Sie für eine Golden-Gate-Klonierung?

Answer 9

Typ II S Restriktionsenzym

Question 10

Wie können Sie ohne Restriktionsenzyme klonieren?

Answer 10

Mit der Gate-Way-klonierung.

Question 11

Nennen Sie ine wichtiges Problem des Gibson-Clonings

Answer 11

Die frei werdende Enden haben eine Tendenz mit sich selbst zu hypritisieren un ein Loop zu bilden.