VL-3 Hybridisierung: Southern, Northern, RNAi

Question 1

Wie kann man nachweisen, dass dsRNA Moleküle zu RNA Interferenz führen?

Answer 1

2 Ansätze, beim Doppelstrang sieht man was, bei Einzelstrang nix.

Question 2

Wie wird RNAi in C.elegans oder Arabidopsis verstärkt?

Answer 2

RdRP: durch RNA dependet RNA-Polymerase wird siRNA repliziert

Question 3

3. Welches dieser Enzyme spielt keine essentielle Rolle bei der RNA Interferenz?
   a) Endonuklease
   b) Dicer
   c) Argonaute (AGO)
   d) Topoisomerase
   e) RNA-abhängige RNA-Polymerase
   f) RNA-Polymerase II

Answer 3

D

Question 4

In einer Northern-Hybritisierung mit einer Ribosonde erhalten sie zu viele unspäzifische Banden-Kreuzhybritisierungen. Wie können Sie diese vermindern?

Answer 4

Hohe Stringenz: Temperatur hoch, niedrige Salz konz. Und hohe konz. An Denaturierungs Agentien

Question 5

Welcheder unten angeführten Resultate einer Endprodukt-RT-PCR zur Validierung eines shRNA Ansatzes zeigt, dass das Experiment nicht geeignet für weitere Silencing Experiment

• Zellen transfiziert mit einer shRNA gegen die Ziel-mRNA zeigen kein Amplikon.“Wild Typ“ Zelllinie zeigt ein Amplikon. Zellen transfiziert mit „Vektor-shRNA“ zeigen kein Amplikon. Zelle nur mit „Transfektionsreagenz“ behandelt zeigen Amplikon.
• Zellen transfiziert mit einer shRNA gegen die Ziel-mRNA zeigen kein Amplikon.“Wild Typ“ Zelllinie zeigt ein Amplikon. Zellen transfiziert mit „Vektor-shRNA“ zeigen Amplikon.Zellen nur mit „Transfektionsreagenz“ behandelt zeigen Amplikon.
• Zellen transfiziert mit einer shRNA gegen die Ziel-mRNA zeigen kein Amplikon.“Wild Typ“ Zelllinie zeigen kein Amplikon. Zellen transfiziert mit „Vektor-shRNA“ zeigen kein Amplikon. Zellen mit „Transfektionsreagenz“ behandelt zeigen Amplikon.

Answer 5

das 3te, weil zeigt ZEllen mit Vector shRNA kein Amplikon und 1ste, weil Wildtyp-Zellen zeigt kein Amplikon

Question 6

RNAi kann für funktionelle Genomik genutzt werden. Dies wurde besonders erfolgreich für C.elegans eingesetzt. Warum?

Answer 6

Wegen RNA-Abhängige Polymerase und eingache Aufnahme von siRNA mit E.Coli

Question 7

Sie sind ein Übereifriger Student. Prof sagt Ihnen, dass Sie ein unbekanntes Gen mittels reverser Genetik in Drosophila untersuchen sollen. Sie sollen eine Transposon-Mutagenese machen.Dickköpfig wie Sie sind, versuchen Sie Prof zu überzeugen, lieber RNAi zu benutzen. Nennen Sie Argumente.

Answer 7

-RNAi: spezifischer, einfacher zu designen, reversible, hypomorph
Hypomorph: Knock-down, part.Funktion verhindert.
-Transposons machen das Gen kaputt, welches essenziell ist

Question 8

Homozygote Mausmutanten von Dicer sterben bereits als Embryo, obwohl kein Virenbefall und auch damir auch keine siRNA-Abwehr nötig war. Warum?

Answer 8

DICER produzieren siRNAs und spielen damit eine bedeutende Rolle in der Regulation der Proteinbiosynthese des Körpers. 30% der Genregulation findet über RNAi statt!