UA2 - Caractéristique de la fixation : Affinité Flashcards
Qu’est-ce que l’affinité ?
Puissance de l’interaction entre le ligand et son récepteur
De quoi est-ce que l’affinité entre le ligand et son récepteur dépend ? (
- Structure chimique du ligand
- Structure chimique du récepteur
- Type de liaison entre le ligand et le récepteur
Quelles sont les types de liaisons qui peuvent être effectuées entre un ligand et sa cible ? (4)
- Hydrophobes
- Ioniques
- Hydrogènes
- Van der Waals
(liaisons non covalentes)
Qu’est-ce qu’on utilise pour caractériser l’affinité d’un mx à sa cible?
La concentration nécessaire du mx pour avoir une occupation de 50% des récepteurs (Kd ou Ki)
Quelles sont les 2 approches possibles pour déterminer l’affinité de Kd ou Ki de façon expérimentale ?
- Méthode de saturation
- Méthode de déplacement
(les 2 sont basées sur le principe de la loi d’action de masse)
Quelle est la différence entre la constante de dissociation Kd et Ki
- Kd : Constante de dissociation obtenue par méthode de liaison spécifique de saturation
- Ki : Constante de dissociation obtenue par méthode de déplacement
(les 2 sont équivalents)
Qu’est-ce que la loi d’action de masse ?
Loi qui dit que la vitesse d’un Rx est proportionnelle aux concentration de chacune des substances impliquées.
Selon la loi d’action de masse, quel est le rapport entre la vitesse d’association et de dissociation entre un ligand et son récepteur ?
Vitesse d’association = vitesse de dissociation
Quel paramètre qui caractérise l’affinité du mx pour son récepteur peut être déterminé lorsque la Rx est à l’équilibre ?
Kd (constante de dissociation à l’équilibre)
Vrai ou Faux : Plus Kd est petit, plus l’affinité est faible
Faux. Kd représente la concentration du mx nécessaire pour l’occupation de 50% des récepteurs. Plus Kd est petit, plus l’affinité est grande puisque ça veut dire qu’il a besoin d’une moins grande concentration pour interagir avec 50% des récepteurs
Avec quel type de mx est-ce qu’on préfère utiliser la méthode de saturation pour déterminer la constante de dissociation ?
Les mx dont on possède la version radioactive pour tester
Décrit la méthode de saturation
- Exposition d’une préparation de récepteurs ;a des concentrations croissantes du mx marqué
- Quantification du degré de liaison du mx au récepteur pour chacune des concentrations de mx libre par mesure de la radioactivité
- Détermination de la concentration nécessaire pour occuper 50% des récepteurs (Kd)
À part trouver Kd, la méthode de saturation permet de trouver une autre composante. Laquelle ?
Bmax : Nombre de récepteurs dans la préparation/densité des sites spécifiques exprimés
Quels genres de mx est-ce qu’on doit avoir pour faire la méthode de déplacement ? (2)
- Mx à l’étude
- Mx connu marqué qui se fixe au même récepteur que le mx à l’étude
Décrit la méthode de déplacement
- Mise en contact du mx marqué connu avec des récepteurs pour qu’il y ait fixation
- Ajout de concentrations croissantes du mx à l’étude
- Observation du déplacement du mx connu par le mx à l’étude pour déterminer Kd
À part trouver Kd, la méthode de déplacement permet de trouver une autre composante. Laquelle ?
IC50
Quels sont les intérêts de faire des tests comme la méthode de liaison pour déterminer le Kd (ou Ki) ? (5)
- Permet de comparer l’affinité de différents ligands pour un même récepteur
- Permet de comparer l’affinité de différents récepteurs pour un même ligands
- Permet la classification des ligands et des récepteurs par ordre d’affinité
- Permet d’orienter la recherche lors du développement de nouveaux mx
- Permet la prédiction du mécanisme d’action
Vrai ou faux : Pour un récepteur donné, le Kd (ou Ki) reste identique peu importe la localisation du récepteur
Vrai
