Trafic Pt. III

Question 1

Les protéines Snare: c’est quoi?

Answer 1

• Prots transmembranaires
• > 30 dans les ç eucaryotes
• Fonctionnent par couples complémentaires vSNARE/tSNARE

Question 2

Où trouve-t-on la vSnare? Et la tSnare?

Answer 2

v : membrane de la Vésicule

t : membrane de la Target

Question 3

Quel est le rôle des protéines Snare?

Answer 3

• Spécifité de l’arrimage des vésicules
• Fusion avec le compartiment accepteur
• Augmenter la vitesse de fusion de la vésicule

Question 4

Comment les prots SNARE agissent-elles?

Answer 4

• Seulement si elles sont à <8nm l’une de l’autre
• Leurs hélices alpha s’entremêlent
• Energie libérée pour arrimer la vésicule et expulser l’eau entre les 2 membranes

Question 5

A quoi sert le complexe NSF?

Answer 5

Sépare la vSNARE de la tSNARE après la fusion grâce à l’énergie de l’ATP

Question 6

A quoi servent les protéines RAB?

Answer 6

GTPases d’adressage :

• facilitent + régulent vitesse de l’arrimage vésiculaire
• augmentent vitesse de correspondance vSNARE-tSNARE

Question 7

Combien de protéines RAB existe-t-il?

Answer 7

> 60, chacune spécifique à un organite

Question 8

Quel est le rôle du GTP avec les prots RAB?

Answer 8

• Rab liée au GDP: inactive, cytosolique, soluble : enfouit le lipide hydrophobe et s’intègre au fP de la Membrane de la vésicule
• Rab liée au GTP: active, intégrée à la membrane de la vésicule: groupement lipide hydrophobe démasqué

Question 9

Comment se passe l’échange GDP/GTP?

Answer 9

Par le facteur d’échange des nucléotides guanine GEF spé des ptites prots Rab

Question 10

Que fait l’effecteur Rab?

Answer 10

• Prot TM du compartiment cible
• Reconnaît Rab-GTP avant que les snare ne se touchent
• Augmente la vitesse d’arrimage

Question 11

Qui se charge de l’hydrolyse du GTP?

Answer 11

La rab avec une protéine GAP, puis rab recyclée et réutilisée en échangeant GDP contre GTP

Question 12

Les microsomes sont-ils des organites?

Answer 12

Non, ils n’existent pas dans les ç vivantes

Question 13

Comment les microsomes sont-ils obtenus?

Answer 13

Par homogénéisationn de la ç: Homogénéisation du REG va donner des microsomes rugueux, idem pour le lisse

Question 14

Comment peut-on séparer les microsomes lisses des rugueux?

Answer 14

Par centrifugation avec gradient de saccharose (rugueux + denses)

Question 15

Pourquoi est-il intéressant d’étudier les microsomes?

Answer 15

Gardent les fonctions du RE

Question 16

Comment a-t-on démontré l’existence du signal de translocation?

Answer 16

Traduction in vitro de l’ARNm:
- Avec microsomes: prot produite de taille normale
- Sans microsomes: Prot beaucoup + grande: env. 2000 Da = 20 AA
CCL: il existe un peptide leader en N-terminal sur les protéines sécrétées qui est dégradé en présence de microsomes

Question 17

Comment a-t-on démontré la translocation des proytéines sécrétées dans le lumen du RE?

Answer 17

Traduction in vitro d’un ARNm:
- Avec microsomes + protéase: prot intacte
- Sans microsomes et avec protéase: Prot complètement dégradée
- Prot sans peptide signal pour le RE: complètement dégradée
CCL: La prot portant le peptide signal est protégée de la protéase parce qu’elle est transposée dans le microsome

Question 18

Pourquoi le peptide signal est-il suffisant?

Answer 18

La fusion d’un signal d’adressage au RE sur une prot n’en ayant normalement pas suffit à la protéger de la protéase: le peptide signal est donc suffisant pour adresser la prot au RE

Question 19

Où se produit la synthèse de la protéine?

Answer 19

Dans le cytosol

Question 20

Dans quel sens la synthèse de la protéine se fait-elle?

Answer 20

• ARNm lu par les ribosomes du 5’ vers 3’

- N-terminale (peptide signal) émerge en 1er → permet de diriger ma prot vers le pore de translocation

Question 21

Qu’est-ce que le translocateur?

Answer 21

Complexe protéique dans la membrane du RE

Question 22

Les deux conformations du translocateur?

Answer 22

• Fermé quand il ne travaille pas → imperméabilité du RE

- S’ouvre en changeant de conformation: assure la translocation d’une prot

Question 23

Comment la translocation débute-t-elle?

Answer 23

Séquence signal s’intègre dans le translocateur: chaîne polypeptidique en croissance forme une boucle

Question 24

Que fait la signal peptidase?

Answer 24

Enzyme TM

• associée au translocateur (site actif dans l’exodomaine)
• Clive le peptide signal (coupure à la fois co-traductionnelle et co-translocationnelle)

Question 25

Qu’est-ce que la particule de reconnaissance du signal ou SRP?

Answer 25

Complexe protéique cytosolique reconnaissant le peptide signal

Question 26

De quoi la particule de reconnaissance/SRP est-elle constituée?

Answer 26

• 6 chaînes protéiques #

- Une petite molécule d’ARN 7S: transcrite par l’ARN polymérase III

Question 27

Qu’est-ce qui permet à la SRP de reconnaître plusieurs types de peptides signal?

Answer 27

La séquence N-terminale d’une 20aine d’AA plutôt hydrophobes

Question 28

Que va faire la SRP?

Answer 28

• Reconnaître le peptide signal
• Se lie au peptide signal (poche de fixation sur la SRP)
• Se lie au ribosome des que le peptide signal émerge et entraîne une pause de la traduction

Question 29

De quoi la poche de fixation de la SRP est-elle constituée?

Answer 29

• Plusieurs hélices hydrophobes

- Nombreuses méthionines

Question 30

Caractéristiques du récepteur de la SRP?

Answer 30

• Prot TM de la membrane du RE

- Situé à proximité du translocon (permet d’associer le ribosome au translocon aant de rejeter la SRP)