Trafic Pt. III Flashcards
Les protéines Snare: c’est quoi?
- Prots transmembranaires
- > 30 dans les ç eucaryotes
- Fonctionnent par couples complémentaires vSNARE/tSNARE
Où trouve-t-on la vSnare? Et la tSnare?
v : membrane de la Vésicule
t : membrane de la Target
Quel est le rôle des protéines Snare?
- Spécifité de l’arrimage des vésicules
- Fusion avec le compartiment accepteur
- Augmenter la vitesse de fusion de la vésicule
Comment les prots SNARE agissent-elles?
- Seulement si elles sont à <8nm l’une de l’autre
- Leurs hélices alpha s’entremêlent
- Energie libérée pour arrimer la vésicule et expulser l’eau entre les 2 membranes
A quoi sert le complexe NSF?
Sépare la vSNARE de la tSNARE après la fusion grâce à l’énergie de l’ATP
A quoi servent les protéines RAB?
GTPases d’adressage :
- facilitent + régulent vitesse de l’arrimage vésiculaire
- augmentent vitesse de correspondance vSNARE-tSNARE
Combien de protéines RAB existe-t-il?
> 60, chacune spécifique à un organite
Quel est le rôle du GTP avec les prots RAB?
- Rab liée au GDP: inactive, cytosolique, soluble : enfouit le lipide hydrophobe et s’intègre au fP de la Membrane de la vésicule
- Rab liée au GTP: active, intégrée à la membrane de la vésicule: groupement lipide hydrophobe démasqué
Comment se passe l’échange GDP/GTP?
Par le facteur d’échange des nucléotides guanine GEF spé des ptites prots Rab
Que fait l’effecteur Rab?
- Prot TM du compartiment cible
- Reconnaît Rab-GTP avant que les snare ne se touchent
- Augmente la vitesse d’arrimage
Qui se charge de l’hydrolyse du GTP?
La rab avec une protéine GAP, puis rab recyclée et réutilisée en échangeant GDP contre GTP
Les microsomes sont-ils des organites?
Non, ils n’existent pas dans les ç vivantes
Comment les microsomes sont-ils obtenus?
Par homogénéisationn de la ç: Homogénéisation du REG va donner des microsomes rugueux, idem pour le lisse
Comment peut-on séparer les microsomes lisses des rugueux?
Par centrifugation avec gradient de saccharose (rugueux + denses)
Pourquoi est-il intéressant d’étudier les microsomes?
Gardent les fonctions du RE
Comment a-t-on démontré l’existence du signal de translocation?
Traduction in vitro de l’ARNm:
- Avec microsomes: prot produite de taille normale
- Sans microsomes: Prot beaucoup + grande: env. 2000 Da = 20 AA
CCL: il existe un peptide leader en N-terminal sur les protéines sécrétées qui est dégradé en présence de microsomes
Comment a-t-on démontré la translocation des proytéines sécrétées dans le lumen du RE?
Traduction in vitro d’un ARNm:
- Avec microsomes + protéase: prot intacte
- Sans microsomes et avec protéase: Prot complètement dégradée
- Prot sans peptide signal pour le RE: complètement dégradée
CCL: La prot portant le peptide signal est protégée de la protéase parce qu’elle est transposée dans le microsome
Pourquoi le peptide signal est-il suffisant?
La fusion d’un signal d’adressage au RE sur une prot n’en ayant normalement pas suffit à la protéger de la protéase: le peptide signal est donc suffisant pour adresser la prot au RE
Où se produit la synthèse de la protéine?
Dans le cytosol
Dans quel sens la synthèse de la protéine se fait-elle?
- ARNm lu par les ribosomes du 5’ vers 3’
- N-terminale (peptide signal) émerge en 1er → permet de diriger ma prot vers le pore de translocation
Qu’est-ce que le translocateur?
Complexe protéique dans la membrane du RE
Les deux conformations du translocateur?
- Fermé quand il ne travaille pas → imperméabilité du RE
- S’ouvre en changeant de conformation: assure la translocation d’une prot
Comment la translocation débute-t-elle?
Séquence signal s’intègre dans le translocateur: chaîne polypeptidique en croissance forme une boucle
Que fait la signal peptidase?
Enzyme TM
- associée au translocateur (site actif dans l’exodomaine)
- Clive le peptide signal (coupure à la fois co-traductionnelle et co-translocationnelle)
Qu’est-ce que la particule de reconnaissance du signal ou SRP?
Complexe protéique cytosolique reconnaissant le peptide signal
De quoi la particule de reconnaissance/SRP est-elle constituée?
- 6 chaînes protéiques #
- Une petite molécule d’ARN 7S: transcrite par l’ARN polymérase III
Qu’est-ce qui permet à la SRP de reconnaître plusieurs types de peptides signal?
La séquence N-terminale d’une 20aine d’AA plutôt hydrophobes
Que va faire la SRP?
- Reconnaître le peptide signal
- Se lie au peptide signal (poche de fixation sur la SRP)
- Se lie au ribosome des que le peptide signal émerge et entraîne une pause de la traduction
De quoi la poche de fixation de la SRP est-elle constituée?
- Plusieurs hélices hydrophobes
- Nombreuses méthionines
Caractéristiques du récepteur de la SRP?
- Prot TM de la membrane du RE
- Situé à proximité du translocon (permet d’associer le ribosome au translocon aant de rejeter la SRP)
